МОНОМЕРНЫЙ АЛЛЕРГОИД ИЗ КЛЕЩЕЙ ДОМАШНЕЙ ПЫЛИ DERMATOPHAGOIDES PTERONYSSINUS: ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Цель работы. Изучить иммунологические свойства мономерного аллергоида, полученного из экстракта клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus (D. pteronyssinus). Материалы и методы. Для получения мономерного аллергоида экстракт клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronissinus (D1) модифицировали сукцинилированием, после чего определяли степень модификации и концентрацию белка. Анализ белков в нативном (D1) и модифицированном экстракте (sD1) проводили методом электрофореза в полиакриламидном геле. Определение в нативном экстракте D1 главного аллергена Der p 1 осуществляли при помощи использования метода масс-спектрометрии. Для оценки изменений третичной структуры белковых молекул в экстракте D1, а также рекомбинантного Der p 1 (rDer p 1) после их модификации сукцинилированием был использован метод спектрального кругового дихроизма (КД). Аллергенность sD1 оценивали методом торможения связывания аллерген-специфического IgE в ИФА и с использованием хемилюминесцентного анализа на приборе Phadis ImmunoCAP. Оценку аллергенности sD1 также осуществляли путем детекции гистамина, высвобождающегося из лейкоцитов цельной крови больных с сенсибилизацией к аллергенам D. pteronyssinus (Der p) после инкубации ее in vitro с D1 и sD1. Изучение иммуногенности D1 и sD1 осуществляли на мышах линии BALB/c, которых иммунизировали внутрибрюшинно четырехкратно с интервалом в 3 нед D1 или sD1 как без адъюванта, так и с адъювантом - Al(OH)3. Уровни анти-Der p IgE, IgG1 и IgG2a в пуллированных сыворотках мышей определяли методом ИФА. Результаты. сукцинилирование экстракта D1 приводило к разворачиванию («анфолдингу») аллергенных молекул; степень модификации sD1 составляла 98,9%. Результаты электрофореза продемонстрировали, что нативный D1 и сукцинилированный sD1 экстракты показали полосы в зоне одинаковых молекулярных масс, что подтверждает отсутствие влияния сукцинилирования на размер молекул белка в экстракте sD1 (то есть модифицированный экстракт сохраняет мономерность). Масс-спектрометрический анализ экстракта D1 выявил присутствие мажорного аллергена Der p 1 в немодифицированном экстракте D1. Методом кругового дихроизма показано изменение третичной структуры клещевых аллергенов после их модификации на примере рекомбинантного белка мажорного аллергена Der p 1, модифицированного сукцинилированием. Оценка аллергенности sD1, осуществленная методами торможения связывания IgE и определением гистамина, высвобождающегося из лейкоцитов крови, показала существенное ее снижение по сравнению с немодифицированным D1 экстрактом. Иммунизация мышей BALB/c sD1 как с адъювантом Al(OH)3, так и без него индуцировала анти-Der p IgE-ответ существенно ниже такового при иммунизации немодифицированным D1. Б то же время анти-Der p IgG1- и IgG2a-ответы при иммунизации sD1 с адъювантом или без, были значительно выше таковых при иммунизации немодифицированным D1. Заключение. Модификация экстракта клещей домашней пыли D. pteronyssinus сукцинилированием приводит к образованию мономерного аллергоида, обладающего пониженной аллергенностью и сохраненной (или даже повышенной) иммуногенностью, что может быть новым подходом при создании аллерговакцин для безопасной и эффективной аллерген-специфической иммунотерапии.

Об авторах

Александр Александрович Бабахин

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

Email: alexbabahin@list.ru
Institute of Immunology Москва

А А Ласкин

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

Institute of Immunology Москва

Б Б Смирнов

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

Institute of Immunology Москва

С М Андреев

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

Institute of Immunology Москва

К К Бабиевский

ФГБУ «Институт элементоорганиигских соединений им. А.Н. Несмеянова РАН»

Nesmeyanov's Institute for Elemento-Organic Compounds RAS Москва

И С Гущин

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

Institute of Immunology Москва

М Р Хаитов

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

Institute of Immunology Москва

Список литературы

  1. Papadopoulos N.G., Agache I., Bavbek S. et al. Research needs in allergy: an EAACI position paper, in collaboration with EFA. Clinical and Translational Allergy. 2012, v. 2, p. 1-3.
  2. Jarvis D., Newson R., Lotval J. et al. Asthma in adults and its association with chronic rhinosinusitis: The GA2LEN survey in Europe. Allergy. 2012, v. 67, p. 91-98.
  3. Курбачева О.М., Ильина Н.И. Лечение аллергического ринита: когда, как и зачем? Рос. Аллергол. Журн. 2006, № 2, с. 66-75.
  4. Platt-Mills T.A. The future of allergy and clinical immunology lies in evaluation, treatment and research on allergic disease. J. Allergy Clin. Immunol. 2002, v. 110, p. 565-566.
  5. Platt-Mills T.A., Ervin E.A., Heymann P.W, Woodfolk J.I. Pro: The evidence for a causal role of dust mites in asthma. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2009, v. 180, p. 109-121.
  6. Noon L. Prophylactic inoculation against hay fever. Lancet. 1911, v. 1, р. 1572-1573.
  7. Бабахин А.А., Гущин И.С., Андреев С.М. и соавт. Химическая модификация аллергена, ведущая к изменению его эпитопной активности. Патол. физиол. 1999, № 1, с. 17-20.
  8. Бабахин А.А., Андреев С.М., Бабиевский К.К. и соавт. Аллерген-специфическая иммунотерапия химически модифицированными аллергенами. Часть 1. Аллергенность и иммуногенность сукцинилированного аллергена и его комплексов с иммуномодулятором полиоксидонием. Физиол. и патол. иммунной системы. Иммунофармакогеномика. 2011, № 3, с. 17-37.
  9. Bradford M.M. A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding Reproduction Research Laboratoriеs, Department of Biochemistry. Ann. Biochem. 1976, v. 72, p. 248-254.
  10. Laemmli U.K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4. Nature. 1970, v. 227, p. 680-685.
  11. Greenfield N.J. Application of circular dichroism in protein and peptide analysis. Trends in Analytical Chemistry. 1999, v. 18, p. 236-244.
  12. Бабахин А.А., Ласкин А.А., Камышников О.Ю. и соавт. Модель экспериментальной бронхиальной астмы, индуцированной у мышей аллергенным экстрактом из клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus. Росс. Аллергол. Журн. 2015, № 6, с. 25-33.
  13. Platts-Mills T.A., Vervloet D., Thomas W.R. et al. Indoor allergens and asthma: report of the Third International Workshop. J. Allergy Clin. Immunol. 1997, v. 100, p. 2-24.
  14. Бабахин А.А., Хаитов Р.М., Петров Р.В. Экспериментальное обоснование аллерген-специфической иммунотерапии химически модифицированными аллергенами (аллерготропинами). Физиол. и патол. иммунной системы. 2004, № 2, с. 20-25.
  15. Platts-Mills T.A., Mitchell E.B., Rowntree S. et al. The role of dust mite allergens in atopic dermatitis. Clin. Exp. Dermatol. 1983, v. 8, p. 233-247.
  16. Sporic R., Chapman M.B., Platts-Mills T.A. House dust mite exposure as a cause of asthma. Clin. Exp. Allergy. 1992, v. 22, p. 897-906.
  17. Platts-Mills T.A., Carter M.C. Asthma and indoor exposure to allergens. N. Engl. J. Med. 1997, v. 336, p. 1382-1384.
  18. Babakhin A.A., DuBuske L.M., Wheeler A.W et al. Immunological properties of allergen chemically modified with synthetic copolymer of N-vinylpirrolidone and maleic anhydride. Allergy Proceedings. 1995, v. 16, p. 261-268.
  19. Бабахин А.А., Литвин Л.С., Стеценко О.Н. и соавт. Аллерген-специфическая иммунотерапия химически модифицированными аллергенами. Часть 2. Гипосенсибилизация аллерготропиноидом (комплексом мономерного аллергоида и иммуномодулятора полиоксидония) на модели экспериментальной аллергической бронхиальной астмы. Физиол. и патол. иммунной системы. 2011, № 11, с. 3-22.
  20. Бабахин А.А., Шершакова Н.Н., Камышников О.Ю. и соавт. Аллерген-специфическая иммунотерапия хими чески модифицированными аллергенами. Часть 3. Эффективность аллергенной иммунотерапии мономерным аллергоидом, адъювантированным липидированным экзополисахаридом из Shigella sonnei, на экспериментальной модели атопического дерматита. Физиол. и патол. иммунной системы. Иммунофармакогеномика. 2014, № 9, с. 3-26.
  21. Cirkovic T.D., Bukilica M.N., Gavrovic M.D. et al. Physicochemical and immunologic characterization of low-molecular-weight allergoids of Dactylis glomerata pollen proteins. Alltrgy. 1999, v. 54, p. 128-134.
  22. Mistrello G., Brenna O., Roncarolo D. et al. Monomeric chemically modified allergens: immunologic and physicochemical characterization. Allergy. 1996, v. 51, p. 8-15.
  23. Mistrello G., Roncarolo D., Zanoni D. et al. Allergic relevance of Cupressus arizonica pollen extract and biological characterization of the allergoid. Int. Arch. Allergy Immunol. 2002, v. 129, p. 296-3004.
  24. Mistrello G., Harfi H., Roncarolo D. et al. Date palm pollen allergoid: characterization of its chemical-physical and immunological properties. Int. Arch. Allergy Immunol. 2008, v. 145, p. 224-230.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Фармарус Принт Медиа, 2016

Согласие на обработку персональных данных

 

Используя сайт https://journals.rcsi.science, я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных») даю согласие на обработку персональных данных на этом сайте (текст Согласия) и на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика» (текст Согласия).