Получение и характеристика рекомбинантного белка, содержащегоантигенные эпитопы аллергена Bet v 2 березы повислой


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Цель исследования. Получение иммунологически активного рекомбинантного белка-аллергена Bet v 2 пыльцы березы. Материалы и методы. Из образца пыльцы березы была выделена мрНК. С помощью методики SMART была получена библиотека кДНК. С помощью ПЦр с праймерами с кДНК амплифицировали ген Bet v 2. Полученный ПЦр-фрагмент гена был клонирован в вектор pET-29b(+). рекомбинантный белок Bet v 2 был экспрессирован в клетках E. coli, трансформированных плазмидой. рекомбинантный белок очищали с использованием Ni-NTA агарозы. Иммунологическую активность рекомбинантного белка Bet v 2 определяли с помощью ИФА и иммуноблота. Результаты. Б ходе работы была создана система по наработке препарата рекомбинантного аллергена Bet v 2, пригодного для иммунологических тестов. На первом этапе из пыльцы березы, собранной на территории РФ, был клонирован ген аллергена Bet v 2. Ген был включен в вектор pET29(+) для экспрессии в бактериальных клетках. С данной плазмидой был получен экспрессионный штамм клеток E. coli. Б бактериальных клетках активировался синтез рекомбинантного белка, который накапливался в тельцах включения. Была разработана методика выделения рекомбинантного белка Bet v 2 из телец включения с помощью одного раунда хроматографической очистки. Быделение рекомбинантного белка проводили с помощью хроматографии на Ni-агарозе. Б результате был получен высокоочищенный препарат рекомбинантного аллергена. Б ИФА узнавание рекомбинантного белка Bet v 2 сыворотками различалось, что говорит о разной степени сенсибилизации пациентов к данному аллергену. Б иммуноблот-тесте препарат был активен только в 15% случаев. По всей видимости, активные эпитопы данного аллергена в основном конформационные и активны в тесте ИФА, тогда как линейные эпитопы, активные в иммуноблоте, составляют малую часть. Заключение. Создана система для наработки препарата рекомбинантного аллергена Bet v 2, пригодного для иммунологических тестов.

Об авторах

А Б Чернышева

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

Б Б Тютяева

ФГБУН Институт молекулярной биологии им. Б.А. Энгельгардта РАН

А Б Пивоварова

ФГБУН Институт молекулярной биологии им. Б.А. Энгельгардта РАН

И В Андреев

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

М Н Санков

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

Ю В Кузьменко

ФГБУН Институт молекулярной биологии им. Б.А. Энгельгардта РАН

Е С Стародубова

ФГБУН Институт молекулярной биологии им. Б.А. Энгельгардта РАН

Александр Игоревич Мартынов

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

Email: medimm@mail.ru

Б Л Карпов

ФГБУН Институт молекулярной биологии им. Б.А. Энгельгардта РАН

Список литературы

  1. Казиев А.Х., Райкис Б.Н., Пожарская В.О. Перспективы разработки рекомбинантных аллергенов. Аллергология. 2002, т. 2, с. 17-20.
  2. Erler A., Hawranek Т., Krückemeier L. et al. Proteomic profiling ofbirch (Betula verrucosa) pollen extracts from different origins. Proteomics. 2011, v. 11 (8), p. 1486-1498.
  3. Cromwell O., Häfner D., Nandy A. Recombinant allergens for specific immunotherapy. J. Allergy Clin. Immunol. 2011, v. 127 (4), p. 865-872.
  4. Schmidt W.M., Mueller M.W. CapSelect: a highly sensitive method for 5’ CAP-dependent enrichment of full length cDNA in PCR-mediated analyses of mRNAs. Nucleic Acid Res. 1999, v. 27, p. 31.
  5. Zhu Y.Y., Machleder E.M., Chenchik A. et al. Reverse transcriptase template switching: a SMART approach for full-length cDNA library construction. Biotechniques. 2001, v. 30, p. 892-897.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Фармарус Принт Медиа, 2012

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».