Ростовые характеристики штаммов экспериментальной живой гриппозной вакцины с модифицированными генами NP и NS

Обоснование. На сегодняшний день вакцинация является наиболее эффективным средством борьбы с эпидемиями гриппа, но иммуногенность современных гриппозных вакцин не всегда удовлетворительна. Одним из способов повышения иммуногенности аттенуированной живой гриппозной вакцины считают укорочение рамки считывания белка NS1 — модулятора противовирусного врожденного иммунитета. Кроме того, оптимизировать Т-клеточный ответ на вакцинацию можно путем включения в геном вакцинных штаммов гена NP от эпидемического родительского вируса.

Материалы и методы. Рамка считывания белка NS1 донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 была усечена до 126 аминокислотных остатков сайт-направленным мутагенезом. В качестве модельного вируса использовали штамм А/Ануи/1/2013 (H7N9), гены HA, NA и NP которого были клонированы в вектор pCIPolISapIT. Сборку рекомбинантных вирусов гриппа осуществляли при помощи трансфекции клеток Vero необходимым набором плазмид. Ростовые свойства полученных вирусов определяли в развивающихся куриных эмбрионах, инкубированных при различных температурах, а также в тканях респираторного тракта мышей (носовые ходы, легкие).

Результаты. Экспериментальные вакцинные штаммы живой гриппозной вакцины подтипа H7N9 с формулами генома 6:2 и 5:3, несущие в своем составе полноразмерный или укороченный ген NS1, активно реплицировались в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальных условиях, сохраняя при этом температурочувствительный и холодоадаптированный фенотипы, свойственные классическим штаммам живой гриппозной вакцины. У всех вирусов отсутствовала способность размножаться в легких мышей линии C57BL/6J, что подтверждает аттенуированный фенотип вирусов. В носовых ходах мышей реплицировались только вирусы с полноразмерным геном NS1, тогда как вирусы, экспрессирующие укороченный белок NS1, не обнаруживали в респираторном тракте животных.

Заключение. Полученные результаты свидетельствуют, что модификация гена NS вакцинного штамма и включение в состав генома NP гена от вирулентного вируса не влияют на его ростовые характеристики в развивающихся куриных эмбрионах. Снижение активности репликации вирусов в верхних дыхательных путях мышей при укорочении рамки считывания белка NS1 указывает на усиление аттенуирующих свойств модифицированных вакцин, что открывает перспективы применения новых вакцин у детей младше трех лет.