Влияние амфотерицина в на чувствительность к гриппозной инфекции клеток WI-38 VA-13 с нокаутом гена IFITM3

Обоснование. Применение системы CRISPR/Cas9 представляется одним из быстро развивающихся направлений в биотехнологии. Данный метод был использован для получения клонов клеточной линии человеческого происхождения с нокаутом одного или нескольких генов семейства IFITM, являющихся факторами рестрикции гриппозной инфекции. Ранее было показано, что амфотерицин В способствует увеличению гриппозной инфекции за счет блокировки функции IFITM3.

Цель — оценить влияние амфотерицина В на чувствительность клеток с нокаутом генов семейства IFITM к инфекции вирусом гриппа А.

Методология. Клетки WI-38 VA-13 и их мутантные клоны с нокаутом гена IFITM3 (клон F3) или генов IFITM1, IFITM3 (клон Е12) заражали вирусом гриппа A/PR/8/34 (H1N1) в присутствии или отсутствие амфотерицина В. Через 48 ч после заражения отбирали культуральную среду для определения инфекционной активности вируса методом титрования в клеточной культуре MDCK, а также гемагглютинирующей активности вируса. Зараженные клетки окрашивали флуоресцентно меченными антителами против вирусного белка NP и определяли количество инфицированных клеток методом проточной цитометрии.

Результаты. Добавление амфотерицина В повышало гемагглютинирующую и инфекционную активность вируса при его внесении в клеточную культуру WI-38 VA-13, а для клонов с нокаутом генов IFITM разница была незначительная. Аналогичное соотношение было получено для доли зараженных клеток.

Заключение. Мутантные клетки с нокаутом одного или нескольких генов семейства IFITM были одинаково чувствительны к гриппозной инфекции вне зависимости от добавления амфотерицина В, что подтверждает решающее значение дефекта в белке IFITM3 в повышении пермиссивности клеток к вирусу гриппа А.