Выделение антител к гипохлорит-модифицированным липопротеинам низкой плотности из сыворотки крови человека и изучение их специфичности

Обоснование. Модифицированные липопротеины низкой плотности обладают иммуногенными свойствами и индуцируют выработку антител. Миелопероксидаза катализирует окисление ионов хлора до хлорноватистой кислоты. При этом хлорноватистая кислота способствует образованию активных галогенсодержащих соединений, взаимодействующих с белковой и липидной частями липопротеинов низкой плотности, что приводит к их модификации и продукции антител к ним.

Цель — выделение антител к гипохлорит-модифицированным липопротеинам низкой плотности из сывороток крови человека и исследование их специфичности.

Материалы и методы. Для получения модифицированных липопротеинов низкой плотности использовали малоновый диальдегид, уксусный ангидрид и гипохлорит натрия. Антитела класса IgG к липопротеинам низкой плотности, модифицированным гипохлоритом, были выделены методом аффинной хроматографии. Предварительно из сывороток крови человека была выделена общая фракция IgG с использованием MabSelect Xtra. Из этого пула IgG были выделены специфичные антитела к гипохлорит-модифицированным белкам. В качестве сорбента применяли CNBr-сефарозу 4B, конъюгированную с человеческим сывороточным альбумином, модифицированным NaOCl. Специфичность связывания полученных антител против липопротеинов низкой плотности, модифицированных гипохлоритом, проверяли с помощью конкурентного иммуноферментного анализа. Конкурентами выступали липопротеины низкой плотности, модифицированные гипохлоритом натрия, малоновым диальдегидом и уксусным ангидридом, в различных концентрациях (1–250 мкг/мл).

Результаты. В крови человека были обнаружены антитела класса IgG против гипохлорит-модифицированных белков, взаимодействующие с гипохлорит-модифицированным липопротеинам низкой плотности. Связывание антител сыворотки крови человека с липопротеинами низкой плотности, модифицированными гипохлоритом, практически полностью ингибировали только соответствующим образом модифицированные липопротеины низкой плотности, а не нативные или модифицированные уксусным ангидридом. Липопротеины низкой плотности, модифицированные малоновым диальдегидом, также проявляли некоторую конкурирующую активность, но значительно более слабую, чем модифицированные гипохлоритом. За связывание с выделеными антителами к гипохлорит-липопротеинам низкой плотности конкурировали они сами и в меньшей степени — модифицированные малоновым диальдегидом. Липопротеины низкой плотности как нативные, так и модифицированные уксусным ангидридом не уменьшали эффективности связывания антител со своим антигеном.

Заключение. При модификации липопротеинов низкой плотности с помощью гипохлорита натрия формируются эпитопы, отличные от таковых, образующихся при других изучаемых модификациях липопротеинов низкой плотности. Эти эпитопы ответственны за образование специфических антител.