DEVELOPMENT OF METHODS OF PRE-COLUMNAR DERIVATIZATION OF GLUTATHIONES RECOVERED BY 4-METHOXY-2-NITROPHENYLISOTHIOTOCIONATE FOR DETERMINATION BY METHOD OF HIGH-EFFECTIVE LIQUID CHROMATOGRAPHY


如何引用文章

全文:

详细

Nowadays the pharmacological role of glutathione in the therapy of carcinogenesis, neurodegenerative and ocular diseases, heart diseases, the immune system and aging of the organism is being actively investigated. Therefore, for the development of pharmaceutical medical forms on its basis, it is necessary to create an optimal analytical base. The aim of this study is to develop a methodology for the analysis of glutathione recovered by pre-columnar derivatization of 4-methoxy-2-nitrophenyl isothiocyanate. Materials and methods. Since glutathione does not have the necessary spectral characteristics for its direct analysis, a methodology for the determination of glutathione with the use of pre-columnar derivatization of 4-methoxy-2-nitrophenyl-isothiocyanate by reversed-phase high-performance chromatography (RP HPLC) has been developed on that basis. Detection of the resulting derivative has been carried out by absorption in UV light using a diode array detector. Results and discussion. In the course of the experiment described, chromatograms of a glulathione derivative with 4-methoxy-2-nitrophenyl isothiocyanate were obtained. This technique was also evaluated for the possibility of quantitative determination of glutathione. The sensitivity of the methods was 0.01% or 3.1*10-1 mol. The linear relationship between the analytical signal (peak area) and concentration was observed within the range of 0.01–0.08% and the correlation coefficient of 0.995. Conclusion. In the course of the studies, a methodology for the determination of glutathione has been developed with the use of pre-columnarderivatization of 4-methoxy-2-nitrophenyl-isothiocyanate by RP HPLC. In this case, the derivative is formed with the retention time of 22.3 minutes and the absorption maximum of 398 nm. This method also allows estimating the quantitative content of the object under study.

作者简介

K. Alexeeva

FSAEI HE Belgorod National State Research University of the Russian Federation

Email: 740890@bsu.edu.ru

D. Pisarev

FSAEI HE Belgorod National State Research University of the Russian Federation

Email: pisarev@bsu.edu.ru

O. Novikov

FSAEI HE Belgorod National State Research University of the Russian Federation

Email: novikov@bsu.edu.ru

A. Malyutina

FSAEI HE Belgorod National State Research University of the Russian Federation

Email: malyutina_a@bsu.edu.ru

参考

  1. Dickinson D.A., Forman H.J. Cellular glutathione and thiols metabolism // Biochem. Pharmacol. 2012. Vol. 64.P. 1019–1026.
  2. Forman H.J., Dickinson D.A. Oxidative signaling and glutathione synthesis // Biofactors. 2003. Vol. 17. P. 1–12.
  3. Liu H., Wang H., Shenvis S., Hagen T.M., Liu R.M. Glutathione metabolism during aging and in Alzheimer disease // Ann.N.Y.Acad.Sci. 2004. Vol. 1019. P. 346–349.
  4. Wang H., Liu H., Liu R.M. Gender difference in glutathione metabolism during aging in mice, Exp. Gerontology. 2003. Vol. 38. P. 507–517.
  5. De Leve L., Kaplowitz N. Importance and regulation of hepatic GSH // Sem.Liver.Dis. 1990. Vol. 10. P. 251–266.
  6. Meister A., Anderson M. E. Glutathione // Ann.Rev.Biochem. 1983. Vol. 52. P. 711–760.
  7. Hogg N. The biochemistry and physiology of S-nitrosothiols // Ann.Rev. Pharmacol.Toxicol. 2002. Vol. 42. Vol. 585–600.
  8. Oja S.S., Janaky R., Varga V., Saranasaari P. Modulation of glutamate receptor functions by glutathione //Neurochem.Int. 2000. Vol. 37. P. 299–306.
  9. Pompella A., Visvikis A., Paolicchi A., De Tata V., Casini A.F. The changing faces of glutathione, a cellularprotagonist // Biochem Pharmacol. 2003. Vol. 66. P. 1499–1503.
  10. Forman H.J., Zhang H., Rinn A. Glutathione: Overview of its protective roles, measurement, and biosynthesis // Mol.Aspects.Med. 2009. Vol. 30. P. 1–12.
  11. Woodbridge J.E. Glutathione reagent and test method. United States Patent: 3864085A. 1975.
  12. Hissin P.J., Hilf R.A fluorometric method or determination of oxidized and reducedglutathione in tissues // Anal. Biochem. 1976. Vol. 74. P. 214-226.
  13. Agrawal S.B., Agrawal M., Lee E.H., Kramert G.F. Changes in polyamine andglutathione contents of a green alga, Chlorogonium elongatum (dang) france exposedto mercury // Environ.Exp.Botany. 1992. Vol. 32. P. 145–151.
  14. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups // Arch.Biochem.Biophys. 1959. Vol. 82. P. 70–81.
  15. Sutariya V., Wehrung D., Geldenhuys W.J. Development and validation of a novel RP-HPLC method for the analysis of reduced glutathione // J. Chromatogr.Sci. 2012. Vol. 50. Is. 3. P. 271–276.
  16. Iwasaki Y., Saito Y., Nakano Y., Mochizuki K., Sakata O., Ito R., Saito K., Nakazawa H. Chromatographic and mass spectrometric analysis of glutathione in biological samples // J.Chromatogr. B. Analyt. Technol. Biomed. LifeSci. 2009. Vol. 877. Is. 28. P. 3309–3317.
  17. Di Pietra A.M., Gotti R., Bonazzi D., Andrisano V., Carvini V. HPLC determination of glutathione and L-cysteine in pharmaceuticals after derivatization with ethacrynic acid // J.Pharm.Biomed.Anal. 2013. Vol. 12. Is. 1. P. 91–98.
  18. Giustarini, D., Dally-Donne I., Milzani A., Fanty P., Rossi R. Analysis of GSH and GSSG after derivatization with N-ethylmaleimide // Nat.Protoc. 2013. Vol. 8. P. 1660-1669.
  19. Lee S., Yim J., Lim K., Kim J. Validation of a liquid chromatography tandem mass spectrometry method to measure oxidized and reduced forms of glutathione in whole blood and verification in a mouse model as an indicator of oxidative stress // J.Chromatogr.B. 2016. Vol. 1019. P. 45–50.
  20. Gawlik M., Krzyżanowska W., Gawlik M.B., Filip M. Optimization of determination of reduced and oxidized glutathione in rat striatum by HPLC method with fluorescence detection and pre-column derivatization // Acta Chromatographica. 2014. Vol. 36. P. 335–345.
  21. Bald E., Głowacki R. Analysis of saliva for glutathione and metabolically related thiols by liquid chromatography with ultraviolet detection // Amino Acids. 2005. Vol. 28. Is. 4. P. 431–433.
  22. Yan M., G.-B. Shi G., Sui Y., Guo T., Zhang J.-W., Fan S.-J. Determination of reduced glutathione in human plasma by RP-HPLC // Pharmaceutical Journal of Chinese People’s Liberation Army. 2008. Vol. 3. P. 251–253.
  23. Safavi A., Maleki N., Farjami E., Aghakhani Mahyari F. Simultaneous Electrochemical Determination of Glutathione and Glutathione Disulfide at a Nanoscale Copper Hydroxide Composite Carbon Ionic Liquid Electrode, Analytical Chemistry. 2009. Vol. 81. Is. 18. P. 7538–7543.
  24. Raoof J., Ojani R., Karimi-Maleh H. Electrocatalytic oxidation of glutathione at carbon paste electrode modified with 2,7-bis (ferrocenyl ethyl) fluoren-9-one: application as a voltammetric sensor // Journal of Applied Electrochemistry. 2009. Vol. 39. Is. 8. P. 1169–1175.
  25. European Pharmacopoeia. 8th ed. – European Directorate for Quality of Medicines and Health care. Strasbourg, France; 2014. 2727 p.

补充文件

附件文件
动作
1. JATS XML
下载

版权所有 © Alexeeva K.A., Pisarev D.I., Novikov O.O., Malyutina A.Y., 2018

Creative Commons License
此作品已接受知识共享署名 4.0国际许可协议的许可
 

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».