РАЗРАБОТКА МЕТОДИК ИЗОЛИРОВАНИЯ КАРБАМАЗЕПИНА ИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель. Разработать методики изолирования карбамазепина из биологических жидкостей (сыворотка крови, моча) и биологических тканей (печень, почка). Методика. Для изучения экстракции карбамазепина из водных растворов применяли метод жидкость-жидкостной экстракции на стандартных растворах карбамазепина с концентрацией 10 мкг/мл. В качестве экстрагентов использовали органические растворители: гексан, хлороформ, диэтиловый эфир, метилтретбутиловый эфир, этилацетат, смесь хлороформ-пропанол-1 (9:1), экстракцию осуществляли из щелочной среды (рН 9-10). Эксперимент по разработке методик изолирования карбамазепина из сыворотки крови и мочи проводили с использованием модельных смесей с концентрацией карбамазепина 1, 10, 100 мкг/мл. В качестве экстрагентов были апробированы хлороформ и метилтретбутиловый эфир, рН 9-10. При изучении условий изолирования карбамазепина из тканей внутренних органов для приготовления модельных смесей использовали печень и почки интактных лабораторных животных (крыс). Для приготовления модельных смесей биологический образец гомогенизировали в дистиллированной воде (1:4) с помощью ультразвукового гомогенизатора. К 10 г гомогената ткани добавляли 250, 500, 1000 мкл водного раствора карбамазепина с концентрацией 100 мкг/мл (вносимое количество - 25, 50, 100 мкг). Для извлечения целевого вещества из гомогената ткани апробированы подкисленные до рН 2 вода и ацетонитрил. Далее экстракцию проводили органическим растворителем (хлороформ, метилтретбутиловый эфир). Количественное определение карбамазепина в извлечениях из биологических объектов вели методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Результаты. Полученные данные показали, что хлороформ и метилтретбутиловый эфир перспективны для разработки методик пробоподготовки биологических объектов на основе жидкость-жидкостной экстракции. Карбамазепин более полно извлекается из биожидкостей хлороформом. В результате изучения условий изолирования карбамазепина из биологических тканей (печени и почки) установлено, что в качестве изолирующих агентов для карбамазепина эффективны подкисленные полярные растворители (вода, ацетонитрил). Заключение. Установлено, что оптимальным растворителем на стадии выделения карбамазепина из биологических тканей является ацетонитрил, для экстракции вещества из растворов в качестве экстрагента целесообразнее применять хлороформ.

Полный текст

Введение Эпилепсия является распространенным неврологическим расстройством. Важно отметить, что эпилепсия связана с психическими сопутствующими заболеваниями, включая депрессию, беспокойство и психоз. При эпилепсии распространенность самоубийств вдвое выше, чем среди населения в целом [16]. Терапевтический мониторинг лекарственных средств может внести значительный вклад в область лечения эпилепсии, позволив эффективно оптимизировать терапию, подобрать индивидуальные схемы дозирования, установить оптимальный диапазон концентраций в крови человека и сравнить концентрации при которых судороги сдерживаются или при которых возникают побочные эффекты, специфичные для противоэпилептических препаратов. Карбамазепин является противоэпилептическим средством и в настоящее время с успехом применяется для лечения генерализованных тонико-клонических судорог, а также простых и сложных парциальных припадков. Не утратило своего значения и направление терапии, по которому применили карбамазепин для лечения нейропатической боли (невралгия тройничного нерва и пр.). Препарат обычно хорошо переносится. Однако имеются данные об аллергических реакциях, лейкопении, тромбоцитопении, агранулоцитозе, кожных реакциях. В процессе лечения карбамазепином требуется систематически следить за картиной крови. При передозировке карбамазепин может быть опасным для жизни [3, 4, 6]. Поэтому необходим терпевтический мониторинг для помощи в клиническом лечении пациентов с карбамазепиновой токсичностью. В судебно-медицинской практике определение карбамазепина в биологических объектах также имеет важное значение. При производстве судебно-химических экспертиз для обнаружения препарата предложены реакции окрашивания, хроматография в тонком слое сорбента, флюоресцентно-поляризационный иммуноанализ, спектрофотометрия. Для изолирования использованы методы извлечения подкисленной водой или спиртом. Количественное определение рекомендовано проводить колориметрическим методом по продуктам гидролиза или окисления [1, 9]. В зарубежной литературе опубликованы данные об одновременном определении карбамазепина и его метаболитов в биологических жидкостях и лекарственных препаратах с использованием методов жидкость-жидкостной экстракции, дисперсионной жидкость-жидкостной микроэкстракции, твердо-фазной экстракции [14]. Высокоэффективная жидкостная хроматография была выбрана для определения карбамазепина в пробах воды, в тканях моллюска [12], в плазме кролика [14]. Описан метод определения карбамазепина в сыворотке крови человека на основе метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием метода трехсторонней калибровки [11]. Ряд методик требуют дорогостоящего оборудования, высококвалифицированный персонал, трудоемкий процесс подготовки образцов. Цель работы - провести исследования, направленные на разработку методик изолирования карбамазепина из биологических объектов (сыворотка крови, моча, печень, почки), Методика Для изучения экстракции карбамазепина из водных растворов методом жидкость-жидкостной экстракции в качестве экстрагентов использовали следующие органические растворители: гексан, хлороформ, диэтиловый эфир, метилтретбутиловый эфир, этилацетат, смесь хлороформ-пропанол-1 (9:1). Исследования проводили на стандартных водных растворах карбамазепина с концентрацией 10 мкг/мл. Учитывая основные свойства карбамазепина, экстракцию осуществляли из щелочной среды (рН 9-10). Методика экстракции: к 500 мкл водного раствора аналита в пробирке типа Эппендорф добавляли 50 мкл раствора аммония гидроксида 10%, 1000 мкл экстрагента. Проводили однократную экстракцию путем встряхивания на шейкере в течение 5 минут. Органическую и водную фазы разделяли путем центрифугирования при 5000 об/мин в течение 5 минут, слой экстрагента после отделения упаривали в токе теплого воздуха, затем для дальнейшего исследования сухой остаток растворяли в 500 мкл элюента (фосфатный буферный раствор (рН 3) - ацетонитрил (60:40)). В качестве биологических образцов для проведения исследований выбраны: биологические жидкости (сыворотка крови, моча) и биологические ткани (печень и почки интактных лабораторных животных (крыс)). Изолирование карбамазепина из мочи и сыворотки крови проводили с использованием модельных смесей с концентрацией карбамазепина 1, 10, 100 мкг/мл. В качестве экстрагентов были апробированы хлороформ и метилтретбутиловый эфир, показавшие максимальную эффективность при экстракции соединения из его водных растворов. Извлечение карбамазепина из модельных образцов мочи осуществляли по следующей методике: к 1000 мкл модельной смеси в пробирке типа Эппендорф добавляли 100 мкл раствора аммония гидроксида 10%, 1000 мкл экстрагента, однократно экстрагировали путем встряхивания на шейкере 5 минут. Содержимое пробирки центрифугировали со скоростью 5000 об/мин в течение 5 минут, слой экстрагента после отделения упаривали в токе теплого воздуха, затем сухой остаток растворяли в 500 мкл элюента. Изолирование карбамазепина из сыворотки крови осуществляли следующим образом: к 250 мкл модельной смеси в пробирке типа Эппендорф добавляли 50 мкл раствора аммония гидроксида 10%, 1000 мкл экстрагента. Содержимое пробирки встряхивали на лабораторном шейкере в течение 5 минут, затем центрифугировали 5 мин. при 10000 об/мин. Слой экстрагента отделяли, упаривали в токе теплого воздуха, сухой остаток растворяли в 500 мкл элюента. Изучение условий изолирования карбамазепина из внутренних органов (печени и почки). Для приготовления модельных смесей биологический образец гомогенизировали в дистиллированной воде (1:4) с помощью ультразвукового гомогенизатора. К 10 г гомогената ткани добавляли 250, 500, 1000 мкл водного раствора карбамазепина с концентрацией 100 мкг/мл (вносимое количество - 25, 50, 100 мкг). Методика изолирования: модельную смесь в конической колбе вместимостью 100 мл заливали 10 мл растворителя. Учитывая хорошую растворимость карбамазепина в полярных растворителях, для извлечения апробированы подкисленные до рН 2 вода и ацетонитрил. Содержимое колбы настаивали при постоянном перемешивании в течение 1 часа. Вытяжку центрифугировали при 5000 об/мин в течение 5 минут. Супернатант отделяли, подщелачивали раствором аммония гидроксида 25% до рН 10 и проводили двукратную экстракцию органическим растворителем (хлороформ, метилтретбутиловый эфир) порциями по 5 мл. Время каждой экстракции составляло 5 минут. Объединенные извлечения упаривали в токе теплого воздуха, сухой остаток растворяли в 1 мл элюента. Полученный раствор фильтровали через мембранный фильтр с размером пор 5 мкм. Эффективность экстракции оценивали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на жидкостном хроматографе Agilent Technologies 1200 в режиме изократического элюирования с использованием диодно-матричного детектора: хроматографическая колонка: ZORBAX SB-С18 (4,6 х 250 мм х 5 мкм); подвижная фаза (А-В): фосфатный буферный раствор (рН 3) - ацетонитрил (60:40); скорость потока подвижной фазы: 1,0 мл/мин; температура термостата колонки: 40°С. По результатам эксперимента при выделении карбамазепина из образцов биообъектов проведено валидирование предложенных условий с получением удовлетворительных результатов по показателям специфичность, линейность, повторяемость. Результаты исследования В проведенном эксперименте оценивали эффективность извлечения карбамазепина из водных растворов, сыворотки крови, мочи, гомогенизированной ткани печени и почки в зависимости от следующих условий: природы изолирующего агента на стадии настаивания, природы экстрагента, количества вносимого в модельную смесь вещества. Данные о степени извлечения карбамазепина представлены в таблицах 1-7. Таблица 1. Результаты исследований по изучению степени извлечения карбамазепина из водных растворов Растворитель Гексан Хлороформ Хлороформ-пропанол - 1 (9:1) Метилтретбутиловый эфир Диэтиловый эфир Этилацетат Степень извлечения, % (n=6) 15,40 93,26 90,19 92,21 80,17 85,37 16,41 93,32 90,15 92,21 81,07 81,37 16,60 93,58 90,88 92,87 81,51 85,30 16,46 93,94 90,10 91,97 81,71 85,20 16,42 93,89 91,17 92,11 82,05 84,39 15,42 94,38 92,13 92,74 82,27 82,06 Метрологические характеристики Xср.= 16,12 Xср.= 93,73 Xср.= 90,77 Xср.= 92,35 Xср.= 81,46 Xср.= 83,95 SD= 0,55 SD= 0,42 SD= 0,79 SD= 0,36 SD= 0,76 SD= 1,78 RSD= 3,43% RSD= 0,45% RSD= 0,88% RSD= 0,39% RSD= 0,93% RSD= 2,12% Таблица 2. Результаты исследований по изучению эффективности извлечения карбамазепина из мочи (модельные смеси, %, n=6) Концентрация карбамазепина в модельной смеси, 1 мкг/мл Концентрация карбамазепина в модельной смеси, 10 мкг/мл Концентрация карбамазепина в модельной смеси, 100 мкг/мл Метилтретбутиловый эфир Хлороформ Метилтретбутиловый эфир Хлороформ Метилтретбутиловый эфир Хлороформ 75,08 91,98 70,58 89,28 71,23 91,12 77,15 90,45 72,95 90,10 74,11 91,47 76,77 93,25 76,54 92,13 70,12 92,69 75,35 90,66 70,93 90,22 71,66 88,93 76,52 93,39 74,11 90,44 69.70 90,96 76,24 90,84 75,35 92,94 71,24 91,81 Метрологические характеристики Xср.= 76,19 Xср.= 91,76 Xср.= 73,41 Xср.= 90,85 Xср.= 71,34 Xср.= 91,16 SD= 0,8133 SD= 1,319 SD= 2,384 SD = 1,386 SD = 1,548 SD= 1,255 RSD= 1,067% RSD= 1,437% RSD= 3,248% RSD = 1,525% RSD = 2,169% RSD= 1,377% Установлено, что наиболее полно карбамазепин из водных щелочных растворов извлекается хлороформом и метилтретбутиловым эфиром. Введение в хлороформ полярного растворителя пропанола-1 привело к некоторому снижению экстракции карбамазепина. Результаты исследований показали, что наименьшее выделение вещества наблюдается при использовании в качестве экстрагента гексана. Лучшие результаты были применены в опытах с модельными смесями биожидкостей и тканей. Таблица 3. Результаты исследований по изучению эффективности извлечения карбамазепина из сыворотки крови (модельные смеси, %, n=6) Концентрация карбамазепина в модельной смеси, 1 мкг/мл Концентрация карбамазепина в модельной смеси, 10 мкг/мл Концентрация карбамазепина в модельной смеси, 100 мкг/мл Метилтретбутиловый эфир Хлороформ Метилтретбутиловый эфир Хлороформ Метилтретбутиловый эфир Хлороформ 68,56 88,92 63,60 89,91 66,75 85,09 69,49 91,81 68,71 86,71 68,86 88,29 67,27 88,97 65,36 90,58 69,75 87,46 70,68 86,89 65,77 92,41 67,81 86,83 69,60 90,49 68,21 91,15 67,74 92,79 68,24 90,73 67,11 92,09 69,85 85,19 Метрологические характеристики Xср.= 68,97 Xср.= 89,64 Xср.= 66,46 Xср.= 90,47 Xср.= 68,46 Xср.= 87,61 SD= 1,199 SD= 1,741 SD= 1,919 SD= 2,065 SD= 1,235 SD= 2,833 RSD= 1,738% RSD= 1,942% RSD= 2,887% RSD= 2,282% RSD= 1,803% RSD= 3,234% Таблица 4. Результаты исследований по изучению степени выделения карбамазепина из ткани печени при использовании на стадии настаивания подкисленной воды (модельные смеси, %, n=6) Внесено 25 мкг карбамазепина Внесено 50 мкг карбамазепина Внесено 100 мкг карбамазепина Метилтретбутиловый эфир Хлороформ Метилтретбутиловый эфир Хлороформ Метилтретбутиловый эфир Хлороформ 64,50 69,69 64,42 74,30 60,57 72,47 60,35 72,07 62,83 69,76 61,38 71,42 63,50 74,40 63,48 71,80 64,78 70,14 63,06 73,50 64,62 72,64 63,16 71,24 63,42 67,16 61,17 68,40 59,40 71,07 61,03 68,10 61,44 70,11 61,79 70,54 Метрологические характеристики Xср.= 62,64 Xср.= 70,82 Xср.= 62,99 Xср.= 71,17 Xср.= 61,85 Xср.= 71,15 SD= 1,601 SD= 2,954 SD= 1,462 SD= 2,151 SD= 1,906 SD= 0,803 RSD= 2,556% RSD= 4,171% RSD= 2,320% RSD= 3,023% RSD= 3,082% RSD= 1,128% Таблица 5. Результаты исследований по изучению степени выделения карбамазепина из ткани печени при использовании на стадии настаивания подкисленного ацетонитрила (модельные смеси, %, n=6) Внесено 25 мкг карбамазепина Внесено 50 мкг карбамазепина Внесено 100 мкг карбамазепина Метилтретбутиловый эфир Хлороформ Метилтретбутиловый эфир Хлороформ Метилтретбутиловый эфир Хлороформ 65,92 84,05 72,98 84,88 72,86 83,83 67,31 78,32 73,80 81,83 71,26 80,41 69,09 78,96 72,62 83,19 70,11 81,14 67,51 82,96 70,45 83,41 69,75 82,38 65,89 85,64 70,61 82,93 69,80 80,12 66,33 83,11 69,25 78,05 70,28 81,15 Метрологические характеристики Xср.= 67,01 Xср.= 82,17 Xср.= 71,62 Xср.= 82,38 Xср.= 70,68 Xср.= 81,51 SD= 1,231 SD= 2,905 SD= 1,767 SD= 2,338 SD= 1,201 SD= 1,382 RSD= 1,836% RSD= 3,536% RSD= 2,467% RSD= 2,837% RSD= 1,699% RSD= 1,695% При проведении исследований по изучению эффективности извлечения карбамазепина из биологических жидкостей полученные данные свидетельствуют о том, что карбамазепин более полно извлекается хлороформом порядка 88-91% аналита как из мочи, так и из сыворотки крови на уровне трех концентраций карбамазепина - 1, 10, 100 мкл/мл (табл. 2, 3). При экстракции метилтретбутиловым эфиром количество выделенного карбамазепина составило: не менее 70% из мочи, не менее 66% из сыворотки крови (табл. 2, 3), возможно, это можно объяснить процессом соосаждения карбамазепина с компонентами биоматрицы. Таблица 6. Результаты исследований по изучению степени извлечения карбамазепина из ткани почки при использовании на стадии настаивания подкисленной воды (модельные смеси, %, n=6) Внесено 25 мкг карбамазепина Внесено 50 мкг карбамазепина Внесено 100 мкг карбамазепина Метилтретбутиловый эфир Хлороформ Метилтретбутиловый эфир Хлороформ Метилтретбутиловый эфир Хлороформ 60,92 66,63 64,24 71,32 64,79 70,87 57,61 69,49 61,14 70,73 60,09 70,94 66,14 70,21 60,83 70,53 60,59 71,58 62,67 71,29 61,04 70,54 60,49 72,41 62,26 65,89 61,50 70,92 62,68 72,03 64,45 73,69 62,25 72,09 64,96 73,07 Метрологические характеристики Xср.= 62,34 Xср.= 69,53 Xср.= 61,83 Xср.= 71,02 Xср.= 62,27 Xср.= 71,82 SD= 2,946 SD= 2,916 SD= 1,28 SD= 0,599 SD= 2,213 SD= 0,859 RSD= 4,726% RSD= 4,194% RSD= 2,070% RSD= 0,8447% RSD= 3,555% RSD= 1,196% Таблица 7. Результаты исследований по изучению степени извлечения карбамазепина из ткани почки при использовании на стадии настаивания подкисленного ацетонитрила (модельные смеси, %, n=6) Внесено 25 мкг карбамазепина Внесено 50 мкг карбамазепина Внесено 100 мкг карбамазепина Метилтретбутиловый эфир Хлороформ Метилтретбутиловый эфир Хлороформ Метилтретбутиловый эфир Хлороформ 65,02 81,43 70,83 82,19 68,76 83,53 67,06 81,70 70,94 80,77 68,31 81,15 68,95 85,41 71,45 82,98 69,67 81,87 70,50 81,18 71,36 83,17 70,66 83,02 65,64 83,44 68,71 82,51 71,36 79,64 61,84 79,90 69,72 78,65 71,76 80,93 Метрологические характеристики Xср.= 66,5 Xср.= 82,18 Xср.= 70,5 Xср.= 81,71 Xср.= 70,09 Xср.= 81,69 SD= 3,065 SD= 1,95 SD= 1,073 SD= 1,724 SD= 1,403 SD= 1,432 RSD= 4,608% RSD= 2,373% RSD= 1,522% RSD= 2,110% RSD= 2,002% RSD= 1,753% Исследования по изучению степени выделения карбамазепина из тканей печени и почки проводили с использованием на стадиях настаивания подкисленной воды (табл. 4, 6) и подкисленного ацетонитрила (табл. 5, 7). При применении ацетонитрила выход вещества в среднем составлял на 5-10% выше по сравнению с подкисленной водой. Эксперименты вели на трех уровнях концентраций (25, 50, 100 мкг карбамазепина). После получения органической вытяжки проводили экстракцию хлороформом и метилтретбутиловым эфиром. Максимальное извлечение карбамазепина достигалось при экстракции хлороформом: из ткани почки и печени (на 1 стадии вода) - около 70%, (на 1 стадии ацетонитрил) - не менее 80%. При экстракции метилтретбутиловым эфиром выделено порядка 62 % анализируемого вещества (на 1 стадии вода), порядка 66-70% (на 1 стадии ацетонитрил). Обсуждение результатов исследования Полученные результаты исследования показали, что хлороформ и метилтретбутиловый эфир перспективны для разработки методик пробоподготовки биологических объектов на основе жидкость-жидкостной экстракции. Согласно результатам, приведенным в табл. 1, степень извлечения карбамазепина из водных растворов составила: хлороформом - 93,7%, метилтретбутиловым эфиром - 92,3%. Применение гексана в данном случае не целесообразно, так как степень выделения вещества не более 16%. Соответственно лучшие результаты были перенесены в опыты с модельными смесями биожидкостей (моча, сыворотка крови). Исследования вели на уровне трех концентраций карбамазепина - 1, 10, 100 мкл/мл с целью установления возможности изолирования низких концентраций анализируемого вещества. В ходе экспериментов показано, что экстракция соединения хлороформом позволяет достичь порядка 88-91% аналита как из мочи, так и из сыворотки крови на всех изучаемых уровнях концентрации (табл. 2, 3). Выделение карбамазепина с помощью метилтретбутилового эфира из биожидкостей (модельные смеси) составило несколько низкий процент (по сравнению с водными растворами): не менее 70% из мочи, не менее 66% из сыворотки крови, это можно объяснить процессом соосаждения карбамазепина с компонентами биоматрицы. Для экстракции карбамазепина из биологических жидкостей целесообразнее использовать хлороформ с целью получения более высокого процентного выхода вещества. Выделение веществ из образцов тканей составляет более сложную задачу. Недостатоком биологических тканей является значительное содержание в них соэкстрактивных веществ. Поэтому процесс подготовки проб более трудоемкий. Здесь присутствуют две стадии экстрагирования. На первой стадии применяются полярные, амфифильные растворители (вода, этанол, ацетон, ацетонитрил и др.), на второй стадии в полученной водной (ацетонитрильной) вытяжке необходимо вещество перевести в молекулярное неионизированное состояние, данная неионизированная форма соединений легче растворяется в органических растворителях, кроме того в органическую фракцию переходит преимущественно анализируемое вещество, соэкстрактивные вещества биообъектов остаются в большей степени в водной (ацетонитрильной) вытяжке. Эксперименты вели на трех уровнях концентраций (25, 50, 100 мкг карбамазепина). На первой стадии нами апробированы растворители: вода, ацетонитрил, на второй стадии органические реагенты: хлороформ, метилтретбутиловой эфир. Определение карбамазепина вели после получения органической вытяжки на второй стадии изолирования. Результаты изучения условий изолирования карбамазепина из биологических тканей (модельные смеси тканей печени и почки) на первой стадии выделения показали, что подкисленные полярные растворители (вода, ацетонитрил) эффективны в качестве изолирующих агентов для карбамазепина, можно отметить, что при применении ацетонитрила выход вещества в среднем составлял на 5-10% выше по сравнению с водой. Максимальное извлечение карбамазепина на всех трех уровнях концентраций достигалось при применении на второй стадии экстракции молекулярной формы аналита хлороформом: из ткани почки и печени (на 1 стадии вода) - около 70%, (на 1 стадии ацетонитрил) - не менее 80%. Применение метилтретбутилового эфира позволило выделить порядка 62% анализируемого вещества при использование воды на 1 стадии, порядка 66-70% при использование ацетонитрила на 1 стадии изолирования. В качестве оптимального изолирующего агента нами рекомендован на 1 стадии изолирования из тканей внутренних органов ацетонитрил, на второй стадии - хлороформ, что позволяет достичь более высокого выхода карбамазепина (табл. 4-7). Кроме того, при выборе растворителя на 1 стадии руководствовались следующими фактами: ацетонитрильное извлечение визуально более чистое по сравнению с водным, быстро фильтруется, при встряхивании с хлороформом практически не образует эмульсию. В соответствии с разработанной методикой изолирования карбамазепина провели эксперименты с «холостыми» пробами. Установлено, что на хроматограммах всех исследованных образцов отсутствуют интерферирующие пики со временами удерживания, близкими к карбамазепину. Работа выполнена на базе судебно-химического отделения ГАУЗ «Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РТ». В литературе встречаются данные по выделению карбамазепина из образцов биологического происхождения. Следует отметить, что системного подхода к изолированию вещества при этом не наблюдается, авторы проводят пробоподготовку в различных условиях. Из образцов волос карбамазепин изолировали с использованием ферментативного гидролиза, затем проводили экстрагирование смесью гексан : диэтиловый эфир : пропанола-1, далее анализу подвергали органический экстракт [8, 13]. Другие авторы также вели выделение из образцов волос путем щелочного гидролиза и дальнейшего экстрагирования смесью гексан : этилацетат (5:1) [2]. Из биологических образцов (модельные смеси плазма крови) карбамазепин извлекали методом микроэкстракции [10, 15]. В источниках литературы также встречается применение метилтретбутилового эфира для экстракции карбамазепина [7], поэтому данный растворитель был включен нами в ряд изучаемых экстрагентов. Предложено множество подходов и способов определения карбамазепина в крови, сыворотке крови, плазме крови методами газовой хроматографии, газовой хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией, высоко-эффективной жидкостной хроматографии с различными вариантами детектирования. В качестве пробоподготовки предложены: твердо-фазная экстракция, жидкость-жидкостной экстракции, где в качестве экстрагентов применяют диэтиловый эфир, метилтретбутиловый эфир, ацетонитрил, хлороформ, этилацетат [5, 7]. Таким образом, единый подход к выделению и определению карбамазепина согласно литературным данным отсутствует, поэтому существует актуальность и необходимость в разработке методов его изолирования, идентификации и количественного определения. Разработанные нами методики показали возможность выделения карбамазепина как из биологических жидкостей, так и из биологических тканей. Новизна исследования заключается в разработке системного подхода к пробоподготовке и дальнейшему определению карбамазепина. В данной работе предложены условия для выделения карбамазепина из биологических объектов учитывающие такие факторы как доступность реагентов, оптимальное время выполнения работ, для количественной оценки использован метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, характеризующийся высокой чувствительностью, позволяющий работать с низкими концентрациями веществ, специфичностью, экспрессностью. Выводы 1. Изучен процесс экстракции карбамазепина из водных растворов с рН 9-10. Полученные данные показали, что хлороформ и метилтретбутиловый эфир перспективны для экстракционных методик пробоподготовки биологических объектов. 2. На модельных смесях разработаны условия жидкость-жидкостной экстракции карбамазепина из биологических жидкостей. Для биоматериала в качестве оптимального растворителя на стадии настаивания тканей выбран ацетонитрил, в качестве экстрагента - хлороформ. 3. Оценена специфичность хроматографических условий с учетом отсутствия интерферирующих пиков со временами удерживания, близкими к карбамазепину, на хроматограммах всех исследованных образцов.
×

Об авторах

Наталия Александровна Хабиева

Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы Минздрава Респ. Татарстан

Email: email@example.com
заведующий отделением ГАУЗ «Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РТ» Россия, 420029, Казань, Сибирский тракт, 31А

Елена Николаевна Люст

Пермская государственная фармацевтическая академия

Email: email@example.com
кандидат фармацевтических наук, доцент, доцент кафедры токсикологической химии ФГБОУ ВО ПГФА Минздрава России (г. Пермь) Россия, 614990, Пермь, ул. Екатерининская, 101

Марат Исмагилович Тимерзянов

Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы Минздрава Респ. Татарстан

Email: email@example.com
доктор медицинских наук, начальник ГАУЗ «Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РТ» Россия, 420029, Казань, Сибирский тракт, 31А

Список литературы

  1. Вергейчик Т.Х., Шабалин С.В. Определение карбамазепина в трупном материале с использованием производной спектрофотометрии // Судебно-медицинская экспертиза. - 1993. - №1. - С. 32-34. @@Vergeychik T.H., Shabalin S.V. Sudebno-medicinskaya ekspertiza. Forensic medical examination. - 1993. - N1. - P. 32-34. (in Russian)
  2. Кислякова Я.Ю., Шешко Т.Ф., Серов Ю.М. Исследование условий для извлечения лекарственных препаратов из волос и их анализа методом хромато-масс-спектрометрией // Химия в интересах устойчивого развития. - 2016. - №24. - С. 103-110. @@Kislyakova Y.Yu., Sheshko T.F., Serov Yu.M. Himiya v interesah ustojchivogo razvitiya. Chemistry for sustainable development. - 2016. - N24. - P. 103-110. (in Russian)
  3. Кутлубаев М.А. Cуицидальное поведение при неврологических заболеваниях: частота, предрасполагающие факторы, подходы к профилактике // Неврологический журнал. - 2016. - №3. - С. 124-130. @@Kutlubaev M.A. Nevrologicheskij zhurnal. Neurological Journal. - 2016. - N3. - P. 124-130. (in Russian)
  4. Маслов О.Г., Брусин К.М., Новикова О.В. Особенности клиники и интенсивной терапии при острых отравлениях карбамазепином // Вестник уральской медицинской академической науки. - 2010. - №1. - С. 31-33. @@Maslov O.G., Brusin K.M., Novikova O.V. Vestnik ural'skoj medicinskoj akademicheskoj nauki. Bulletin of the Ural Medical Academic Science. - 2010. - N1. - P. 31-33. (in Russian)
  5. Пирогов А.В., Гандлевский Н.А., Васильева А.А. и др. Высокочувствительное определение карбамазепина, окскарбазепина, идентификация продуктов их деградации в вещественных доказательствах и в трупном материале печени человека методом ГХ-МС // Журнал аналитической химии. - 2023. - Т.78, №6. - С. 546-558. @@Pirogov A.V., Gandlevskij N.A., Vasil'eva A.A. i dr. ZHurnal analiticheskoj himii. Journal of Analytical Chemistry. - 2023. - V.78, N6. - P. 546-558. (in Russian)
  6. Пылаева О.А., Мухин К.Ю., Шатенштейн А.А. Эпилепсия и риск суицида (обзор литературы) // Русский журнал детской неврологии. - 2013. - Т.VIII, №2. - С. 23-40. @@Pylaeva O.A. Mukhin K.Yu., Shatenstein A.A.Russkij zhurnal detskoj nevrologii.Russian Journal of Pediatric Neurology. - 2013. - V.VIII, N2. - P. 23-40. (in Russian)
  7. Родина Т.А., Мельников Е.С., Соколов А.В. и др. Методика одновременного определения карбамазепина и карбамазепин-10,11-эпоксида методом ВЭЖХ-МС/МС // Клиническая фармакология. - 2015. - №4. -С. 20-25. @@Rodina T.A., Melnikov E.S., Sokolov A.V. i dr. Klinicheskaya farmakologiya. Clinical pharmacology. - 2015. - N4. - P. 20-25. (in Russian)
  8. Симонов Е.А., Изотов Б.Н., Фесенко А.В. Наркотики: методы анализа на коже, в её придатках и выделениях. - М.: Анахарсис, 2000. - 130 c. @@Simonov E.A., Izotov B.N., Fesenko A.V. Narkotiki: metody analiza na kozhe, v eyo pridatkah i vydeleniyah. Drugs: methods of analysis on the skin, in its appendages and secretions. - Moscow: Anaharsis, 2000. - 130 p. (in Russian)
  9. Шабалин С.В., Вергейчик Т.Х. Методика изолирования карбамазепина из трупного материала и определение его методом флюоресцентно-поляризационногоиммуноанализа // Судебно-медицинская экспертиза. - 1993. - №4. - С. 29-30. @@Shabalin S.V., Vergeychik T.H. Sudebno-medicinskaya ekspertiza. Forensic medical examination. - 1993. - N4. - P. 29-30. (in Russian)
  10. Datar A. Prasanna Quantitative bioanalytical and analytical method development of dibenzazepine derivative, carbamazepine: A review // Journal of Pharmaceutical Analysis. - 2015. - N5. - Р. 213-222.
  11. Ghafghazia Sh., Zanjania T.M., Vosough M. et al.Interference-free Determination of Carbamazepine in Human Serum Using High Performance Liquid Chromatography: A Comprehensive Research with Three-way Calibration Methods // Iranian Journal of Pharmaceutical Research. - 2017. - N16(1). - P. 120-131.
  12. Jaouania R., Dellalia M., Mouneyracb C. and others. Assessment of carbamazepine acute toxicity in the cockle Cerastoderma edule through chemical, physiological and biochemical tools // Brazilian Journal of Biology. - 2022. - V.82.
  13. Kintz P., Marescaux С., Mangin P. Testing human hair for carbamazepine in epileptic patients: is hair investigation suitable for drag monitoring? // Human and Experimental Toxicology. - 1995. - V.14(10). - Р. 812-815.
  14. Mowafy H.A., Alanazi F.K., Maghraby G.M. Development and validation of an HPLC-UV method for the quantification of carbamazepine in rabbit plasma // Saudi Pharmaceutical Journal. - 2012. - N20(1). - P. 29-34.
  15. Rani S., Malik A.K. A novel microextraction by packed sorbent-gas chromatography procedure for the simultaneous analysis of antiepileptic drugs in human plasma and urine // Journal of Separation Science. - 2012. - N35. - Р. 2970-2977.
  16. Sirven J.I. Management of epilepsy comorbidities // Continuum (Minneapolis, Minn). - 2016. - N22(1 Epilepsy). - P. 191-203.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать


Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».