ОПТИМИЗАЦИЯ СПОСОБА ПОЛУЧЕНИЯ И МЕТОДИК АНАЛИЗА ПРЕПАРАТА «КРАТЕГУС»

Полный текст

Введение Свежие плоды боярышника однопестичного (Crataegus monoqyna Jacq.) могут быть использованы для получения настойки гомеопатической матричной «Кратегус», который получается на основе 96% спирта этилового [1-4]. Качество данного лекарственного препарата нормируется Государственной Фармакопеей Российской Федерации XV издания [4], однако фармакопейная статья на анализ свежих плодов боярышника однопестичного в настоящее время отсутствует. Методом качественного анализа служит тонкослойная хроматография с обнаружением гиперозида, а также используются результаты качественных реакций [4]. Реакция с раствором хлорида железа (III) позволяет обнаруживать дубильные вещества, содержащиеся в настойке. При выполнении этой реакции должно наблюдать темно-зеленое окрашивание. Также появление желтого окрашивание при нагревании настойки с медно-тартратным реактивом является свидетельством наличия в анализируемой настойке восстанавливающих сахаров [4]. Свежие плоды боярышника однопестичного содержат флавоноиды, среди которых присутствуют как восстановленные (процианидины), так и окисленные (гиперозид) формы [6, 7]. Следует отметить, что, по нашим данным, в свежих плодах боярышника превалируют именно восстановленные формы флавоноидов, которые представляют собой производные катехина. При этом подходы к количественному анализу препарата «Кратегус» предусматривают определение суммы окисленных флавоноидов в пересчете на гиперозид. Анализ проводится методом дифференциальной спектрофотометрии, особенность которого является то, что необходимо отвесить две одинаковые по массе аликвоты [4]. Одна навеска предназначена для получения исследуемого раствора, другая служит для приготовления раствора сравнения. На наш взгляд, это обстоятельство представляется очень сложной задачей даже для опытного аналитика. При этом содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид для препарата «Кратегус» должна быть не менее 0,004%. Низкий уровень действующих веществ рассматриваемого препарата, составляющих нормируемый показатель, на наш взгляд, не в полной мере объективен. Ранее были разработаны методики анализа суммы восстановленных флавоноидов в пересчете на катехин для анализа свежих и высушенных плодов боярышника и препаратов на их основе [6]. Было показано, что эффективная термическая экстракция для свежих плодов боярышника проводится с применением 70% этилового спирта. В данной методике успешно используется прямая спектрофотометрия, для проведения которой необходимо использовать одну аликвоту. Целью работы явилась разработка методики анализа для настойки гомеопатической матричной «Кратегус», полученной на основе свежих плодов боярышника однопестичного (Crataegus monoqyna Jacq.). Методика Свежие плоды боярышника однопестичного были собраны в сентябре месяце 2024 г. на территории Ботанического сада Самарского университета. Свежие плоды непосредственно после сбора были разделены на две части. Из одной части свежих плодов были получены настойки на основе 96% этилового спирта, в другом случае в качестве экстрагента для настойки использовался 70% этанол. Другая часть плодов была заморожена и использована аналогично первой уже после размораживания. Замораживание проводилось в условиях бытового холодильника при температуре от -180C до -200C. Получение настоек проводили как методом 2 в соответствии с требованиями Государственной Фармакопеи Российской Федерации XV издания для настоек гомеопатических матричных, так и методом бисмацерации с нагреванием в течение 10 минут на последней стадии получения препарата. Оценку качества полученных настоек проводили по методикам, изложенным в Государственной Фармакопее Российской Федерации XV издания, так и разработанным нами ранее [4, 6]. Результаты исследования и их обсуждение Полученные на основе разных экстрагентов настойки свежих плодов боярышника отличались между собой по цвету. Настойка, полученная на основе 96% этанола, была более светлой по окраске, чем настойки на основе 70% этилового спирта. Качественный анализ, проведенный методом тонкослойной хроматографии, позволил обнаружить гиперозид во настойках, полученных на основе 96% спирта. При этом проведенные качественные реакции с раствором хлорида железа (III) и медно-тартратным реактивом не позволили получить однозначные результаты во всех случаях. Красноватая окраска настойки маскировала окраску результатов реакций. В случае прибавления раствора хлорида железа обнаруживается заметное помутнение, которое может быть вызвано прибавлением к настойке водного раствора. В случае нагревания с медно-тартратным реактивом можно заметить исчезновение синей окраски реактива в ходе реакции. При этом следует отметить, что сахара не являются наиболее значимыми действующими веществами настойки плодов боярышника. К тому же в реакции восстановления могут участвовать и катехины. На наш взгляд, наиболее эффективным методом качественного анализа будет являться прямая спектрофотометрия (рис.). При этом максимум кривой поглощения раствора препарата «Кратегус» должен составлять 282±2 нм. Рис. Электронный спектр кривой поглощения для настойки матричной гомеопатической на основе свежих плодов боярышника однопестичного Полученные нами настойки отличались и по содержанию суммы как восстановленных, так и окисленных флавоноидов (табл. 1-4). При этом следует отметить, что все полученные нами настойки по уровню содержания флавоноидов в пересчете на гиперозид соответствуют требованиям фармакопейной статьи, регламентирующей качество настойки гомеопатической матричной «Кратегус». При этом можно отметить, что настойки, полученные на основе 96% спирта, содержат, как правило, более высокий уровень флавоноидов, чем настойки, полученные на основе 70% этилового спирта. Особенно это заметно в случае анализа суммы окисленных флавоноидов в пересчете на гиперозид. Однако сумма окисленных флавоноидов в пересчете на гиперозид и сумма восстановленных флавоноидов в пересчете на катехин отличается более чем в 50 раз. Содержание производных катехина в препарате более высокое, поэтому, на наш взгляд, следует в качестве метода количественного анализа препарата использовать прямую спектрофотометрию при длине волны 282 нм в пересчете на катехин. Таблица 1. Содержание суммы флавоноидов в настойках матричных гомеопатических на основе свежих плодов боярышника однопестичного (мацерация в течение 10 суток) № п/п Образец Содержание суммы флавоноидов в пересчете на катехин, % Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид, % 1 Настойка плодов боярышника однопестичного, полученная на основе 70% этилового спирта 0,66±0,03 % 0,010±0,001 % 2 Настойка плодов боярышника однопестичного, полученная на основе 96% этилового спирта 0,72±0,04 % 0,012±0,001 % Таблица 2. Содержание суммы флавоноидов в настойках матричных гомеопатических на основе свежих плодов боярышника однопестичного (бисмацерация в течение 5 суток с нагреванием на последней стадии) № п/п Образец Содержание суммы флавоноидов в пересчете на катехин, % Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид, % 1 Настойка плодов боярышника однопестичного, полученная на основе 70% этилового спирта 0,76±0,04 % 0,010±0,001 % 2 Настойка плодов боярышника однопестичного, полученная на основе 96% этилового спирта 0,73±0,04 % 0,017±0,001 % Таблица 3. Содержание суммы флавоноидов в настойках матричных гомеопатических на основе размороженных плодов боярышника однопестичного (мацерация в течение 10 суток) № п/п Образец Содержание суммы флавоноидов в пересчете на катехин, % Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид, % 1 Настойка плодов боярышника однопестичного, полученная на основе 70% этилового спирта 0,18±0,01 % 0,0042±0,0002 % 2 Настойка плодов боярышника однопестичного, полученная на основе 96% этилового спирта 0,23±0,01 % 0,0060±0,0003 % Таблица 4. Содержание суммы флавоноидов в настойках матричных гомеопатических на основе размороженных плодов боярышника однопестичного (бисмацерация в течение 5 суток с нагреванием на последней стадии) № п/п Образец Содержание суммы флавоноидов в пересчете на катехин, % Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид, % 1 Настойка плодов боярышника однопестичного, полученная на основе 70% этилового спирта 0,36±0,02 % 0,0040±0,0002% 2 Настойка плодов боярышника однопестичного, полученная на основе 96% этилового спирта 0,34±0,02 % 0,0071±0,0003% Следует также отметить тот факт, что настойку матричную гомеопатическую «Кратегус» возможно получать как с использованием свежего сырья, так и сырья после размораживания (табл. 1-4) [5]. Собственные выводы согласуются с данными, полученными ранее московскими учеными в отношении гомеопатических препаратов на основе плодов боярышника [8]. Кроме того, нагревание на втором этапе бисмацерации позволяет получить препарат с высоким содержанием действующих веществ и сокращает время настаивания в два раза. Учитывая содержание суммы восстановленных и окисленных флавоноидов в исследуемых настойках, можно сделать вывод о том, что наиболее эффективным экстрагентом для получения препарата настойка матричная гомеопатическая «Кратегус» является 96% спирт. Он позволяет извлекать и восстановленные и окисленные формы флавоноидов. Было также замечено, что при использовании 96% спирта в случае доведения до метки растворов для спектрофотометрии, в мерных колбах наблюдается заметное помутнение, что недопустимо в случае использования оптических методов анализа. При этом помутнения не образуется, если для доведения до метки использовать 70% этиловый спирт. Также, следует полагать не вполне объективным показателем качества для гомеопатической настойки является плотность препарата, лежащая в пределах 0,940-0,970. Данный показатель будет коррелировать с сухим остатком препарата. При этом сухой остаток препарата «Кратегус» должен быть не менее 5,5%, а не ограничен верхним пределом. Необходимо отметить, что все полученные нами образцы настоек соответствовали требованиям Государственной Фармакопеи Российской Федерации XV издания для препарата «Кратегус» по показателям: «Сухой остаток» и «Плотность» [4]. Выводы 1. Настойку гомеопатическую матричную целесообразно получать, используя плоды боярышника однопестичного как свежесобранные, так и после замораживания и последующего размораживания в ходе хранения. 2. Методами качественного анализа для настойки «Кратегус» может являться прямая спекрофотометрия с обнаружением максимума поглощения при 282 нм в сочетании с тонкослойной хроматографией. 3. Методом количественного анализа для полученных настоек матричных гомеопатических может являться прямая спектрофртометрия, позволяющая определять сумму флавоноидов в пересчете на катехин при аналитической длине волны 282 нм. 4. Метод бисмацерации с нагреванием на второй стадии является наиболее эффективным способом получения настойки матричной гомеопатической для свежих плодов боярышника однопестичного.

Об авторах

Аркадий Алексеевич Андреев

ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России

Email: email@example.com
аспирант кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Россия, 443099, Самара, ул. Чапаевская, 89

Владимир Александрович Куркин

ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России

Email: email@example.com
доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Россия, 443099, Самара, ул. Чапаевская, 89

Ольга Евгеньевна Правдивцева

ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России

Email: email@example.com
доктор фармацевтических наук, профессор кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Россия, 443099, Самара, ул. Чапаевская, 89

Виктория Викторовна Стеняева

ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России

Email: email@example.com
кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Россия, 443099, Самара, ул. Чапаевская, 89

Татьяна Михайловна Жавкина

ФГАОУ ВО «Самарский национальный исследовательский университет имени академика С.П. Королева»

Email: email@example.com
начальник отдела дендрологии Ботанического сада Россия, 443086, Самара, Московское шоссе, 34

Список литературы

Дополнительные файлы