Штаммы диплоидных клеток лёгкого летучей мыши Pipistrellus pipistrellus и их пермиссивность к орбивирусам (Reoviridae: Orbivirus) – возбудителям трансмиссивных болезней животных

Обложка

Цитировать

Полный текст

Аннотация

Введение. Культуры клеток летучих мышей являются востребованной моделью как для изоляции вирусов трансмиссивных болезней, так и для оценки возможной роли данных видов млекопитающих в формировании природных резервуаров переносчиков возбудителей арбовирусных инфекций.

Цель исследования. Получение и характеристика штаммов диплоидных клеток лёгкого летучей мыши Pipistrellus pipistrellus, оценка их пермиссивности к вирусам блютанга, африканской чумы лошадей (АЧЛ), эпизоотической геморрагической болезни оленей (ЭГБО).

Материалы и методы. Культуры клеток лёгкого нетопыря-карлика получали методом стандартной ферментативной дезагрегации ткани доноров и селекцией клеток по адгезивным свойствам. Биологические свойства штаммов клеток изучены цитологическими, кариологическими методами. Пермиссивность культур клеток определяли к орбивирусам блютанга, АЧЛ, ЭГБО.

Результаты. Диплоидные штаммы клеток (эпителиоподобного и фибробластоподобного типа), сохраняющие цитоморфологические характеристики и стабильность кариотипа, получены из ткани лёгкого нетопыря-карлика Pipistrellus pipistrellus. Установлена их пермиссивность к вирусам рода Orbivirus семейства Reoviridae возбудителям трансмиссивных заболеваний животных. Паспортизированные штаммы диплоидных клеток чувствительны к орбивирусам блютанга, АЧЛ, ЭГБО. Инфекционная активность вирусов в эпителиоподобной культуре клеток соответствовала активности в референтных культурах Vero и CV-1. Фибробластоподная культура клеток была менее пермиссивна к вирусам блютанга и ЭГБО, однако накопление вируса АЧЛ было выше на 1,52,0 lg ТЦД50/см3.

Обсуждение. Пермиссивность полученных штаммов клеток лёгкого летучей мыши Pipistrellus pipistrellus к вирусам блютанга, АЧЛ, ЭГБО согласуется с данными изоляции орбивирусов у летучих мышей видов Pteropus poliocephalus, Pteropus hypomelanus, Rousettus aegyptiacus leachii, Syconycteris crassa, Myotis macrodactylus, Eidolon helvum.

Заключение. Штаммы диплоидных клеток лёгкого нетопыря-карлика пермиссивны к орбивирусам блютанга, АЧЛ, ЭГБО, что позволяет рекомендовать их для изоляции этих вирусов, а вид Pipistrellus pipistrellus рассматривать как потенциальный природный резервуар и переносчик возбудителей данных трансмиссивных болезней.

Об авторах

Ольга Сергеевна Поволяева

ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии»

Email: 2741188@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-5635-6677

микробиолог

Россия, 601125, Владимирская обл., п. Вольгинский

Анна Александровна Чадаева

ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии»

Email: a_doct_or@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-9615-9758

микробиолог

Россия, 601125, Владимирская обл., п. Вольгинский

Андрей Владимирович Луницин

ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии»

Email: lunicyn@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-5043-446X

старший научный сотрудник, заместитель директора по производству и качеству

Россия, 601125, Владимирская обл., п. Вольгинский

Сергей Григорьевич Юрков

ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии»

Автор, ответственный за переписку.
Email: patronn13@rambler.ru
ORCID iD: 0000-0002-6801-9424

доктор биологических наук, профессор, главный научный сотрудник

Россия, 601125, Владимирская обл., п. Вольгинский

Список литературы

  1. Narladkar B.W. Projected economic losses due to vector and vector-borne parasitic diseases in livestock of India and its significance in implementing the concept of integrated practices for vector management. Vet. World. 2018; 11(2): 151–60. https://doi.org/10.14202/vetworld.2018.151-160
  2. ВОЗ. Трансмиссивные болезни: Информационный бюллетень; 2020. Available at: https://www.who.int/ru/news-room/fact-sheets/detail/vector-borne-diseases
  3. Еремян А.А., Львов Д.К., Щетинин А.М., Дерябин П.Г., Аристова В.А., Гительман А.К. и др. Генетическое разнообразие вирусов вида Chenuda virus (Orbivirus, Reoviridae), циркулирующих в Средней Азии. Вопросы вирусологии. 2017; 62(2): 81–6. https://doi.org/10.18821/0507-4088-2017-62-2-81-86
  4. Maclachlan N.J., Guthrie A.J. Re-emergence of bluetongue, African horse sickness, and other orbivirus diseases. Vet. Res. 2010; 41(6): 35. https://doi.org/10.1051/vetres/2010007
  5. Львов Д.К., Алексеев К.П., Алимбарова Л.М., Алипер Т.И., Альховский С.В., Андронова В.Л. и др. Вирусы и вирусные инфекции человека и животных. Руководство по вирусологии. М.; МИА; 2013.
  6. Attoui H., Mohd Jaafar F. Zoonotic and emerging orbivirus infections. Rev. Sci. Tech. 2015; 34(2): 353–61. https://doi.org/10.20506/rst.34.2.2362
  7. Calisher C.H., Childs J.E., Field H.E., Holmes K.V., Schountz T. Bats: Important reservoir hosts of emerging viruses. Clin. Microbiol. Rev. 2006; 19(3): 531–45. https://doi.org/10.1128/CMR.00017-06
  8. Leroy E.M., Kumulungui B., Pourrut X., Rouquet P., Hassanin A., Yaba P., et al. Fruit bats as reservoirs of Ebola virus. Nature. 2005; 438(7068): 575–6. https://doi.org/10.1038/438575a
  9. Lau S.K., Woo P.C., Li K.S., Huang Y., Tsoi H.W., Wong B.H., et al. Severe acute respiratory syndrome coronavirus-like virus in Chinese horseshoe bats. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2005; 102(39): 14040–5. https://doi.org/10.1073/pnas.0506735102
  10. Ge X.Y., Li J.L., Yang X.L., Chmura A.A., Zhu G., Epstein J.H., et al. Isolation and characterization of a bat SARS-like coronavirus that uses the ACE2 receptor. Nature. 2013; 7477(503): 535–8. https://doi.org/10.1038/nature12711
  11. Aréchiga Ceballos N., Vázquez Morón S., Berciano J.M., Nicolás O., Aznar López C., Juste J., et al. Novel lyssavirus in bat, Spain. Emerg. Infect. Dis. 2013; 19(5): 793–5. https://doi.org/10.3201/eid1905
  12. Jánoska M., Vidovszky M., Molnár V., Liptovszky M., Harrach B., Benko M. Novel adenoviruses and herpesviruses detected in bats. Vet. J. 2011; 189(1): 118–21. https://doi.org/10.1016/j.tvjl.2010.06.020
  13. Aurine N., Baquerre C., Gaudino M., Jean C., Dumont C., Rival-Gervier S., et al. Reprogrammed Pteropus bat stem cells as a model to study host-pathogen interaction during Henipavirus infection. Microorganisms. 2021; 9(12): 2567. https://doi.org/10.3390/microorganisms9122567
  14. Waruhiu C., Ommeh S., Obanda V., Agwanda B., Gakuya F., Ge X.Y., et al. Molecular detection of viruses in Kenyan bats and discovery of novel astroviruses, caliciviruses and rotaviruses. Virol. Sin. 2017; 32(2): 101–14. https://doi.org/10.1007/s12250-016-3930-2
  15. Kohl C., Lesnik R., Brinkmann A., Ebinger A., Radonić A., Nitsche A., et al. Isolation and characterization of three mammalian orthoreoviruses from European bats. PLoS One. 2012; 7(8): e43106. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0043106
  16. Chua K.B., Crameri G., Hyatt A., Yu M., Tompang M.R., Rosli J., et al. A previously unknown reovirus of bat origin is associated with an acute respiratory disease in humans. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2007; 104(27): 11424–9. https://doi.org/10.1073/pnas.0701372104
  17. Макаров В.В., Лозовой Д.А. Новые особо опасные инфекции, ассоциированные с рукокрылыми. Владимир; 2016.
  18. Gonsalves L., Bicknell B., Law B., Webb C., Monamy V. Mosquito consumption by insectivorous bats: does size matter? PLoS One. 2013; 8(10): e77183. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0077183
  19. La Motte L.C. Jr. Japanese B encephalitis in bats during simulated hibernation. Am. J. Hyg. 1958; 67(1): 101–8. https://doi.org/10.1093/oxfordjournals.aje.a119912
  20. Melaun C., Werblow A., Busch M.W., Liston A., Klimpel S. Bats as potential reservoir hosts for vector-borne diseases. In: Klimpel S., Mehlhorn H. Bats (Chiroptera) as Vectors of Diseases and Parasites. Parasitology Research Monographs, Volume 5. Berlin, Heidelberg: Springer; 2014. https://doi.org/10.1007/978-3-642-39333-4_3
  21. Schuh A.J., Amman B.R., Jones M.E., Sealy T.K., Uebelhoer L.S., Spengler J.R., et al. Modelling filovirus maintenance in nature by experimental transmission of Marburg virus between Egyptian rousette bats. Nat. Commun. 2017; 8: 14446. https://doi.org/10.1038/ncomms14446
  22. Smith I., Wang L.F. Bats and their virome: an important source of emerging viruses capable of infecting humans. Curr. Opin. Virol. 2013; 3(1): 84–91. https://doi.org/10.1016/j.coviro.2012.11.006
  23. Gloza-Rausch F., Ipsen A., Seebens A., Göttsche M., Panning M., Drexler J.F., et al. Detection and prevalence patterns of group I coronaviruses in bats, northern Germany. Emerg. Infect. Dis. 2008; 14(4): 626–31. https://doi.org/10.3201/eid1404.071439
  24. Geldenhuys M., Coertse J., Mortlock M., Markotter W. In Vitro Isolation of Bat Viruses Using Commercial and Bat-Derived Cell Lines. Caister Academic Press; 2020: 149–80. https://doi.org/10.21775/9781912530144.10
  25. Banerjee A., Misra V., Schountz T., Baker M.L. Tools to study pathogen-host interactions in bats. Virus Res. 2018; 248: 5–12. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2018.02.013
  26. Crameri G., Todd S., Grimley S., McEachern J.A., Marsh G.A., Smith C., et al. Establishment, immortalisation and characterisation of pteropid bat cell lines. PLoS One. 2009; 4(12): e8266. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0008266
  27. Hoffmann M., Müller M.A., Drexler J.F., Glende J., Erdt M., Gützkow T., et al. Differential sensitivity of bat cells to infection by enveloped RNA viruses: coronaviruses, paramyxoviruses, filoviruses, and influenza viruses. PLoS One. 2013; 8(8): e72942. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0072942
  28. Поволяева О.С., Юрков С.Г., Лаптева О.Г., Колбасова О.Л., Чадаева А.А., Кольцов А.Ю. и др. Биологическая характеристика и пермиссивность к вирусам штамма диплоидных клеток почки летучей мыши нетопыря Натузиуса (Pipistrellus nathusii Keyserling & Blasius, 1839; (Chiroptera: Microchiroptera: Vespertilionidae). Вопросы вирусологии. 2021; 66(1): 29–39. https://doi.org/10.36233/0507-4088-12
  29. OIE; World Animal Health Information System. Disease situation. Available at: https://wahis.oie.int/#/dashboards/country-or-disease-dashboard
  30. Юрков С.Г., Зуев В.В., Сидоров С.И., Кушнир С.Д., Смыслова Н.Ю., Неверовская Н.С. и др. Каталог коллекции клеточных культур ВНИИВВиМ. Покров; 2010.
  31. Ford C.E., Hamerton J.L. A colchicine, hypotonic citrate, squash sequence for mammalian chromosomes. Stain Technol. 1956; 31(6): 247–51. https://doi.org/10.3109/10520295609113814
  32. Rothfels K.H., Siminovitch L. Air drying technique for flattening chromosomes in mammalian cells grown in vitro. Stain Technol. 1958; 33(2): 73–7. https://doi.org/10.3109/10520295809111827
  33. Baker K.S., Todd S., Marsh G., Fernandez-Loras A., Suu-Ire R., Wood J.L.N., et al. Co-circulation of diverse paramyxoviruses in an urban African fruit bat population. J. Gen. Virol. 2012; 93(Pt. 4): 850–6. https://doi.org/10.1099/vir.0.039339-0
  34. Directive 2010/63/EU of the European parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes. Available at: https://eur-lex.europa.eu/legal-content/EN/TXT/?uri=CELEX%3A32010L0063
  35. Fagre A.C., Lee J.S., Kityo R.M., Bergren N.A., Mossel E.C., Nakayiki T., et al. Discovery and characterization of Bukakata orbivirus (Reoviridae:Orbivirus), a novel virus from a Ugandan bat. Viruses. 2019; 11(3): 209. https://doi.org/10.3390/v11030209

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Летучая мышь вида нетопырь-карлик (Pipistrellus pipistrellus).

Скачать (159KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Первично-трипсинизированная культура клеток лёгкого летучей мыши Pipistrellus pipistrellus через 144 ч культивирования (микрофотография, увеличение ×100).

Скачать (113KB)
Метаданные
4. Рис. 3. Монослой культуры клеток лёгкого Pipistrellus pipistrellus: а – диплоидный штамм культуры, 15-й пассаж; б – смешенная культура, 27-й пассаж; в – диплоидный штамм культуры клеток фибробластоподобного типа, 32-й пассаж; г – диплоидный штамм культуры клеток эпителиоподобного типа, 32-й пассаж (микрофотография, увеличение ×150).

Скачать (308KB)
Метаданные
5. Рис. 4. Метафазные пластинки культуры клеток лёгкого Pipistrellus pipistrellus: а – эпителиоподобных клеток; б – фибробластоподобных клеток (микрофотография, увеличение ×900).

Скачать (218KB)
Метаданные
6. Рис. 5. Цитопатическое действие вируса блютанга: а – в культуре diploid cell line P. pipistrellus lung ep., 33-й пассаж, на 3-и сутки; б – контроль diploid cell line P. pipistrellus lung ep., 33-й пассаж; в – в культуре diploid cell line P. pipistrellus lung f., 32-й пассаж, на 6-е сутки; г – контроль diploid cell line P. pipistrellus lung f., 32-й пассаж (микрофотография, увеличение ×150).

Скачать (199KB)
Метаданные
7. Рис. 6. Цитопатическое действие вируса эпизоотической геморрагической болезни оленей: а – в культуре diploid cell line P. pipistrellus lung ep., 33-й пассаж, на 2-е сутки; б – контроль diploid cell line P. pipistrellus lung ep., 33-й пассаж, в – в культуре diploid cell line P. pipistrellus lung f., 32-й пассаж, на 3-и сутки; г – контроль diploid cell line P. pipistrellus lung f., 32-й пассаж (микрофотография, увеличение ×150).

Скачать (197KB)
Метаданные
8. Рис. 7. Цитопатическое действие вируса африканской чумы лошадей: а – в культуре diploid cell line P. pipistrellus lung ep., 32-й пассаж, на 3-и сутки; б – контроль diploid cell line P. pipistrellus lung ep., 32-й пассаж; в – в культуре diploid cell line P. pipistrellus lung f., 32-й пассаж, на 3-и сутки; г – контроль diploid cell line P. pipistrellus lung f., 32-й пассаж (микрофотография, увеличение ×150).

Скачать (286KB)
Метаданные

© Поволяева О.С., Чадаева А.А., Луницин А.В., Юрков С.Г., 2022

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».