Определение содержания кофактора FAD и NAD(P)H-оксидазных комплексов в спленоцитах мышей и клетках карциномы Льюис при апоптозе методом конфокальной микроскопии

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

В настоящей работе исследовано содержание кофактора FAD и ферментных NAD(P)H-оксидазных комплексов методами флуоресцентной и конфокальной микроскопии (с флуорофорами Annexin V–FITC, 7-AAD (7-Aminoactinomycin D), EtBr) при апоптозе, вызванном анфеном натрия в сочетании с пероксидом водорода в спленоцитах здоровых мышей и в опухолевых клетках карциномы Льюис. Применение этих методов дает возможность наблюдать и количественно оценить апоптотический эффект анфена натрия и пероксида водорода, а также позволяет визуализировать метаболитические изменения в клетке, усиление флуоросценции FAD в опухолевых клетках и NAD(P)H-оксидазных комплексов в спленоцитах. Полученные данные свидетельствуют о возможности применения анфена натрия в сочетании с пероксидом водорода в качестве противоопухолевого препарата, действующего на определенные типы клеток.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Е. М. Миль

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук

Email: albantovaaa@mail.ru
Россия, Москва

А. А. Албантова

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук

Автор, ответственный за переписку.
Email: albantovaaa@mail.ru
Россия, Москва

Л. И. Матиенко

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук

Email: albantovaaa@mail.ru
Россия, Москва

А. Н. Голощапов

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук

Email: albantovaaa@mail.ru
Россия, Москва

М. А. Коровин

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук

Email: albantovaaa@mail.ru
Россия, Москва

В. В. Кувыркова

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук

Email: albantovaaa@mail.ru
Россия, Москва

Список литературы

  1. Beloborodova N.V. // General Reanimatology. 2019. V. 15. № 6. P. 62; doi::10.15360/1813-9779-2019-6-62-79
  2. Binyukov V.I., Mil E.M., Matienko L.I., Albantova A.A., Goloshchapov A.N. // Micro (MDPI). 2023. V. 3. № 2. P. 382; htpp//doi.org/10.3390/micro3020026
  3. Матиенко Л.И., Миль Е.М., Бинюков В.И. // Хим. физика. 2020. Т. 39. № 6. С. 87; doi: 10.31857/S0207401X20060084
  4. Mcintosh J.R. // J. Cell Biol. 2001. V. 153. No 6. P.25; doi: 10.1083/jcb.153.6.f25
  5. Захаров Н.С., Попова А.Н., Захаров Ю.А., Пугачёв В.М., Руссаков Д.М. // Хим. физика. 2022. Т. 41. № 7. С. 84; doi: 10.31857/S0207401X22070172
  6. Ткачук В.А., Тюрин-Кузьмин П.А., Белоусов В.В., Воротников А.В. // Биол. мембраны. 2012. Т. 29. № 1–2. С. 21.
  7. Русина И.Ф., Вепринцев Т.Л., Васильев Р.Ф. // Хим. физика. 2022. Т.41. № 2. С. 12; http://doi.org/10.31857/S0207401X22020108
  8. Герасимов Н.Ю., Неврова О.В., Жигачева И.В., Генерозова И.П..Голощапов А.Н. // Хим. физика. 2023. Т. 42. № 1. С. 22; doi: 10.31857/S0207401X23010041
  9. Садыков Р.А., Хурсан С.Л., Суханов А.А., Кучин А.В. // Хим. физика. 2023. T. 42. № 12. С. 3; doi: 10.31857/S0207401X23120099
  10. Миль Е.М., Бинюков В.И., Ерохин В.Н., Албантова А.А., Володькин А.А., Голощапов А.Н. // Цитология. 2020. Т. 62. № 7. С. 503; doi: 10.31857/S0041377120070032
  11. Ерохин В.Н., Кременцова А.В., Семенов В.А., Бурлакова Е.Б. // Изв. АН. Сер. биол. 2020. № 5. C. 583.
  12. Миль Е.М., Бинюков В.И., Ерохин В.Н. // Докл. АН. 2018. Т. 482. № 5. С. 598.
  13. Becker W. // J. Microsc. 2012. V. 247. No 2. P. 119; doi: 10.1111/j.1365-2818.2012.03618.x
  14. Druzkova I.N., Shirmanova M.V., Lukina M.M. et al. // Cell Cycle. 2016. V. 15. № 9. P. 1257; doi: 10.1080/15384101.2016.1160974
  15. Alen L-A.H. // Methods Molec. Biol. 2007. V. 412. P. 273; doi::10.1007/978-1-59745-467-4_18
  16. Rokutan K., Kawahara T., Kuwano Y. et al. // Antioxidants Redox Signaling. 2006. V. 8. № 9–10. P. 1573; doi::10.1089/ars.2006.8.1573
  17. Ma M.W., Wang J., Zhang Q. et al. // Mol. Neurodegeneration. 2017. № 12. P. 7; https://doi.org/10.1186/s13024-017-0150-7
  18. Lukina M. M., Dudenkova V. V., Ignatova N. I. et al. // Biochim. Biophys. Acta – Genetic Subj. 2018. V. 1862. № 8. P. 1693; doi: 10.1016/j.bbagen.2018.04.021
  19. Babkina А.S. // General Reanimatology. 2019. V. 15. № 6. P. 50; https://doi.org/10.15360/1813-9779-2019-6-50-61
  20. Vermot A., Petit-Härtlein I., Smith S.M.E., Fieschi F. // Antioxidants (Basel) 2021. V. 10. № 6: P. 890; doi: 10.3390/antiox10060890
  21. Bedard K., Krause K.H. // Physiol. Rev. 2007. V. 87. № 1. P. 245; doi::10.1152/physrev.00044.20

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Флуоресценция FAD в спленоцитах мышей: единичное (слева) и множественное свечение (справа) в клетках при апоптозе.

Скачать (124KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Микрофотографии спленоцитов при апоптозе, вызванном действием анфена натрия (10-4 М), и увеличенное в 6 раз изображение клетки (на мембране видны гранулы NAD(P)H-оксидазных ферментных комплексов NOX). Конфокальный микроскоп с увеличением 100х (флуорофор – Annexin V-FITC).

Скачать (204KB)
Метаданные
4. Рис. 3. Диаграмма содержания апоптозных клеток в культуре спленоцитов (флуорофор – AnnexinV-FITC) – 1, количество нежизнеспособных клеток (флуорофор EtBr) – 2. Изменение содержания клеток под действием пероксида водорода (5 мкМ), анфена натрия (10-4 М), и при их совместном воздействии.

Скачать (17KB)
Метаданные
5. Рис. 4. Процент клеток с флуоресценцией FAD – 1 и иммунофлуоресцией гранул NAD(P)H-оксидазных комплексов – 2 в культуре спленоцитов под действием пероксида водорода (5 мкМ), анфена натрия (10-4 М) и при их совместном воздействии.

Скачать (65KB)
Метаданные
6. Рис. 5. Микрофотографии нейтрофила в культуре спленоцитов, который находится в стадии нетоза – выброса сети ДНК, окруженной NAD(P)H-оксидазными комплексами – (флуорофор – AnnexinV-FITC(а) и 7AAD (б)). Конфокальный микроскоп с увеличением 100x.

Скачать (171KB)
Метаданные

© Российская академия наук, 2024

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».