Том 50, № 1 (2024)

Предложен новый подход к синтезу ARCA (Anti-Reverse Cap Analog) классической структуры – диметилированного динуклеотида гуанозина ^2mGpppG. Традиционный подход к его получению состоит в конденсации активированного 5′-дифосфата 7,3′-О-диметилгуанозина c 5′-монофосфатом гуанозина. Мы предлагаем использовать 3′-О-метилгуанозин только для синтеза 5′-монофосфата диметилированного гуанозина, а в конденсацию вводить активированный 5′-дифосфат гуанозина. Определены условия фосфорилирования 3′-O-метилгуанозина, позволяющие избежать образования побочного 3′-О-метил-5′- дезокси-5′-хлоргуанозин-2′-фосфата. ARCA синтезирован с высоким выходом (89% на стадии конденсации). Разработанный нами вариант синтеза легко масштабируется и удобен для получения граммовых количеств ARCA.

Цель данного исследования – изучение роли транскрипционного фактора CREB1 в регуляции экспрессии гена, кодирующего митохондриальную форму малатдегидрогеназы (MDH, КФ 1.1.1.37), в печени крыс при экспериментальном аллоксановом диабете. Показано увеличение скорости работы NAD-зависимой малатдегидрогеназы в клетках печени крыс при развитии экспериментального диабета, связанное с активацией работы кодирующих данный фермент генов Mdh1 и Mdh2. Анализ промоторов этих генов показал, что только в составе гена Mdh2 присутствует специфический сайт связывания с транскрипционным фактором CREB1. Выяснено, что в печени крыс с диабетом наблюдается увеличение скорости экспрессии гена, кодирующего данный транскрипционный фактор, что коррелирует с транскрипцией гена Mdh2. Таким образом, полученные нами данные подтверждают возможность положительной регуляции скорости работы гена Mdh2, кодирующего митохондриальную форму малатдегидрогеназы, транскрипционным фактором CREB1.

Предложен метод синтеза конъюгатов ряда кетостероидов с 6-карбоксифлуоресцеином с использованием короткого бифункционального реагента аминооксипропиламина. Стереоизомеры, образующиеся при получении оксимов стероидов, были разделены с помощью препаративной ТСХ и протестированы в поляризационном флуоресцентном иммуноанализе (FPIA) с применением моноклональных антител. Изучены кинетические параметры связывания полученных флуоресцентных производных с моноклональными антителами к прогестерону. Таким образом, разработан эффективный и универсальный подход к синтезу флуоресцентных конъюгатов для иммуноанализа с оптимальной длиной линкера, который улучшает их аналитические характеристики и упрощает их получение. Продемонстрирована перспективность полученных соединений для практического применения в клинической диагностике и при анализе объектов окружающей среды.

Синтезирован ряд 3-аминокумаранонов. Установлено, что они проявляют яркую хемилюминесценцию при различных условиях. Показано, что введение электронно-донорных групп в кумараноновый фрагмент и увеличение сопряженной π-системы кумаранонов может сместить положение максимумов люминесценции на 30–40 нм в длинноволновую область. Показано, что некоторые 3-аминокумараноны могут быть использованы для определения активности уреазы и перекиси водорода.

Синтезирована серия арилиденроданинов и их ациклических аналогов, изучены флуоресцентные свойства полученных соединений. Показано, что производные, содержащие 2,5-диметоксибензилиденовый фрагмент или аналогичные группы, характеризуются заметным варьированием квантового выхода флуоресценции в зависимости от свойств среды. Установлено, что два полученных соединения – диметоксибензилиденроданин и диметоксибензилиденмалононитрил – могут выступать в роли селективных флуорогенных красителей для липидных капель (адипосом) живых клеток для мечения в условиях флуоресцентной микроскопии.