РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКАДАЕВОЙ КИСЛОТЫ В МОРЕПРОДУКТАХ

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Окадаевая кислота (ОК) и ее производные, динофизистоксины, относятся к группе диарейных токсинов (DSP-токсины), которые продуцируются токсинообразующими динофлагеллятами. При поглощении водорослей моллюсками DSP-токсины концентрируются в жировой ткани животных и могут привести к острому отравлению человека при их потреблении. Нами разработана простая, чувствительная и специфичная тест-система для обнаружения и полуколичественного экспресс-определения ОК и ее производных в моллюсках, основанная на прямом конкурентном иммунохроматографическом анализе. На тест-полосках имеются три линии связывания иммунореагентов – тестовая, контрольная и внутренняя линия сравнения, интенсивность окрашивания которой не зависит от концентрации ОК в растворе и сопоставима с интенсивностью окрашивания тестовой линии. При наличии DSP-токсинов в пробе интенсивность окрашивания тестовой линии снижается относительно линии сравнения, что позволяет выявлять присутствие токсинов в пробах. Пробоподготовка включает в себя экстракцию гомогенатов тканей моллюсков метанолом с последующим разведением экстракта раствором для анализа. Тест-полоски изготовлены в формате dip-stick, и процедура анализа заключается в погружении части тест-полоски в пробу на несколько секунд с обработкой результатов через 30 мин. Суммарная продолжительность анализа с учетом пробоподготовки образцов составляет около 1 ч. Тест-система позволяет достоверно обнаруживать и полуколичественно определять ОК в различных моллюсках (устрицы, мидии, вонголе, трубач, морские гребешки) при содержании токсина не более 40 нг/г (визуальный способ регистрации результатов) и не более 10 нг/г (инструментальный способ регистрации результатов), что значительно ниже предельно допустимой концентрации для ОК, установленной Всемирной организацией здравоохранения и Роспотребнадзором (160 нг/г). Кроме ОК, тест-система способна выявлять в моллюсках и ее производные – динофизистоксин-1 и динофизистоксин-2. Разработанная иммунохроматографическая тест-система может быть использована для мониторинга содержания токсинов ОК-группы в моллюсках в России.

Об авторах

Е. К. Синьгов

Федеральное государственное унитарное предприятие “Научный центр “Сигнал”; Институт биофизики клетки – обособленное подразделение Федерального исследовательского центра “Пущинский научный центр биологических исследований РАН”

Email: v_vrublevskaya@mail.ru
Москва, 107014, Россия; Пущино, Московская область, 142290, Россия

О. С. Моренков

Институт биофизики клетки – обособленное подразделение Федерального исследовательского центра “Пущинский научный центр биологических исследований РАН”

Email: v_vrublevskaya@mail.ru
Пущино, Московская область, 142290, Россия

С. В. Сипин

Федеральное государственное унитарное предприятие “Научный центр “Сигнал”

Автор, ответственный за переписку.
Email: v_vrublevskaya@mail.ru
Москва, 107014, Россия

В. В. Врублевская

Институт биофизики клетки – обособленное подразделение Федерального исследовательского центра “Пущинский научный центр биологических исследований РАН”

Email: v_vrublevskaya@mail.ru
Пущино, Московская область, 142290, Россия

Список литературы

  1. Wright J.L.C. Dealing with seafood toxins: Present approaches and future options // Food Res. Int. 1995. V. 28. № 4. Р. 347. https://doi.org/10.1016/0963-9969(95)00001-3
  2. Reguera B., Riobó P., Rodríguez F., Díaz P.A., Pizarro G., Paz B. et al. Dinophysis toxins: Causative organisms, distribution and fate in shellfish // Mar. Drugs. 2014. V. 12. P. 394. https://doi.org/10.3390/md12010394
  3. Blanco J. Accumulation of dinophysis toxins in bivalve molluscs // Toxins. 2018. V. 10. № 11. P. 453. https://doi.org/10.3390/toxins10110453
  4. Hu T., Curtis J.M., Walter J.A., McLachlan J.L., Wright J.L.C. Two new water-soluble DSP toxin derivatives from the dinofagellate Prorocentrum maculosum: Possible storage and excretion products // Tetrahedron Lett. 1995. V. 36. P. 9273. https://doi.org/10.1016/0040-4039(95)02010-M
  5. Domínguez H.J., Paz B., Daranas A.H., Norte M., Franco J.M., Fernández J.J. Dinoflagellate polyether within the yessotoxin, pectenotoxin and okadaic acid toxin groups. Characterization, analysis and human health implications // Toxicon. 2010. V. 56. P. 191. https://doi.org/10.1016/j.toxicon.2009.11.005
  6. Hallegraeff G.M. Harmful algal blooms: A global overview / Manual on Harmful Marine Microalgae / Ed. Hallegraeff G.M. IOC Manuals and Guides. UNESCO, 1995. № 33. P. 1.
  7. Takai A., Murata M., Torigoe K., Isobe M., Mieskes G., Yasumoto T. Inhibitory effect of okadaic acid derivatives on protein phosphatases. A study on structure-affinity relationship // Biochem. J. 1992. V. 284 (Pt 2). P. 539. https://doi.org/10.1042/bj2840539
  8. European Commission Regulation (EC) No. 2074/2005 under regulations 450 (EC) nos. 451 853/2004 and 854/2004 // Off. J. Eur. Comm. 2005. V. 358. P. 27. http://data.europa.eu/eli/reg/2005/2074/oj
  9. Codex Alimentarius Commission. Standard for live and raw bivalve molluscs. Codex standard 292-2008. 2008. P. 9.
  10. European Food Safety Authority (EFSA). Marine biotoxins in shellfish – Summary on regulated marine biotoxins. Scientific opinion of the panel on contaminants in the food chain in feed and food // EFSA J. 2009. V. 1306. P. 1. https://doi.org/10.2903/j.efsa.2009.1306
  11. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы (СанПиН 2.3.2.2401-08) от 16.07.2008.
  12. Rodriguez I., Vieytes M.R., Alfonso A. Analytical challenges for regulated marine toxins. Detection methods // Curr. Opin. Food Sci. 2017. V. 18. P. 29. https://doi.org/10.1016/j.cofs.2017.10.008
  13. Laycock M.V., Jellett J.F., Easy D.H., Donovan M.A. First report of a new rapid assay for diarrhetic shellfish poisoning toxins // Harmful Algae. 2006. V. 5. P. 74. https://doi.org/10.1016/j.hal.2005.05.006
  14. Lu S.-Y., Lin C., Li Y.-S., Zhou Y., Meng X.-M., Yu S.-Y. et al. A screening lateral flow immunochromatographic assay for on-site detection of okadaic acid in shellfish products // Anal. Biochem. 2012. V. 422. P. 59. https://doi.org/10.1016/j.ab.2011.12.039
  15. Hu L., Liu J., Wang Q., Zhang Y., Jia R., Cai C. et al. Development of an immunochromatographic strip test for the rapid detection of okadaic acid in shellfish sample // J. Appl. Phycol. 2013. V. 25. P. 1091. https://doi.org/10.1007/s10811-012-9949-3
  16. Jawaid W., Meneely J.P., Campbell K., Melville K., Holmes S.J., Rice J., Elliott C.T. Development and validation of a lateral flow immunoassay for the rapid screening of okadaic acid and all dinophysis toxins from shellfish extracts // J. Agric. Food. Chem. 2015. V. 63. № 38. P. 8574. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.5b01254
  17. Wang R., Zeng L., Yang H., Zhong Y., Wang J., Ling S. et al. Detection of okadaic acid (OA) using ELISA and colloidal gold immunoassay based on monoclonal antibody // J. Hazard. Mater. 2017. V. 339. P. 154. https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2017.06.030
  18. Mills C., Dillon M.J., Kulabhusan P.K., Senovilla-Herrero D., Campbell K. Multiplex lateral flow assay and the sample preparation method for the simultaneous detection of three marine toxins // Environ. Sci. Technol. 2022. V. 56. № 17. P. 12210. https://doi.org/10.1021/acs.est.2c02339
  19. Hendrickson O.D., Zvereva E.A., Panferov V.G., Solopova O.N., Zherdev A.V., Sveshnikov P.G., Dzantiev B.B. Application of Au@Pt nanozyme as enhancing label for the sensitive lateral flow immunoassay of okadaic acid // Biosensors. 2022. V. 12. Article 1137. https://doi.org/10.3390/bios12121137
  20. Hendrickson O.D., Zvereva E.A., Zherdev A.V., Dzantiev B.B. Cascade-enhanced lateral flow immunoassay for sensitive detection of okadaic acid in seawater, fish, and seafood // Foods. 2022. V. 11. Article 1691. https://doi.org/10.3390/foods11121691
  21. Hendrickson O.D., Zvereva E.A., Solopova O.N., Zherdev A.V., Sveshnikov P.G., Eremin S.A., Dzantiev B.B. Double immunochromatographic test system for sensitive detection of phycotoxins domoic acid and okadaic acid in seawater and seafood // Micromachines. 2022. V. 13. № 9. Article 1506. https://doi.org/10.3390/mi13091506
  22. Zvereva E.A., Hendrickson O.D., Solopova O.N., Zherdev A.V., Sveshnikov P.G., Dzantiev B.B. Triple immunochromatographic test system for detection of priority aquatic toxins in water and fish // Anal. Bioanal. Chem. 2022. V. 414. P. 7553. https://doi.org/10.1007/s00216-022-04298-8
  23. Frens G. Controlled nucleation for the regulation of the particle size in monodisperse gold solution // Nat. Phys. Sci. 1973. V. 241. P. 20.
  24. Matsuura S., Kita H., Takagaki Y. Specificity of mouse monoclonal anti-okadaic acid antibodies to okadaic acid and its analogs among diarrhetic shellfish toxins // Biosci. Biotechnol. Biochem. 1994. V. 58. P. 1471. https://doi.org/10.1271/bbb.58.1471
  25. Mountfort D.O., Suzuki T., Truman P. Protein phosphatase inhibition assay adapted for determination of total DSP in contaminated mussels // Toxicon. 2001. V. 39. P. 383. https://doi.org/10.1016/S0041-0101(00)00144-6.
  26. Louppis A.P., Badeka A.V., Katikou P., Paleologos E.K., Kontominas M.G. Determination of okadaic acid, dinophysistoxin-1 and related esters in Greek mussels using HPLC with fluorometric detection, LC-MS/MS and mouse bioassay // Toxicon. 2010. V. 55. P. 724. https://doi.org/10.1016/j.toxicon.2009.10.026
  27. Vdovenko M.M., Hung C-T., Sakharov I.Y., Yu F-Y. Determination of okadaic acid in shellfish by using a novel chemiluminescent enzyme-linked immunosorbent assay method // Talanta. 2013. V. 116. P. 343. https://doi.org/10.1016/j.talanta.2013.05.057

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Российская академия наук, 2025

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».