Получение и оценка клинической эффективности рекомбинантного антигена T. pallidum Tp0453 для диагностики сифилиса


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель. Получение нового рекомбинантного антигена T. pallidum Tp0453 и изучение эффективности его клинического использования при диагностике сифилиса. Материал и методы. Для получения целевого рекомбинантного антигена T. pallidum фрагмент ДНК возбудителя сифилиса, кодирующий белок Tp0453, был клонирован в вектор pET28а. Для наработки полученной генетической конструкции вектор вводили в штамм E. coli Top10, отбирая канамицин-устойчивые колонии. Специфичность клонирования подтверждена методом секвенирования по Сенгеру. Гетерологическую экспрессию рекомбинантного антигена T. pallidum проводили в штамме E. coli BL21 (DE3). Очистка рекомбинантного варианта белка T. pallidum Tp0453, содержащего дополнительную последовательность из 6 остатков гистидина на N-концевом участке молекулы, осуществлялась методом металл-хелатной хроматографии. Полученный гомогенный рекомбинантный белок T. pallidum Tp0453 был использован в качестве антигена для выявления специфических IgG к исследуемому белку в сыворотке больных сифилисом с использованием иммунологического биочипа. Результаты и заключение. Применение полученного рекомбинантного белка позволило выявить антитела к T. pallidum в сыворотке крови больных сифилисом (первичным, вторичным, скрытым ранним и поздним). При исследовании сыворотки крови, полученной от здоровых доноров, антитела не обнаруживались. На основании приведенных данных можно сделать вывод о возможности использования полученного рекомбинантного белка в качестве дополнительного антигена для диагностики сифилиса. Включение нового антигена в тест-системы для диагностики сифилиса (в формате иммуноферментного анализа, иммуноблоттинга или иммуночипа) расширяет возможности серологической диагностики данного заболевания за счет увеличения спектра определяемых антител к T. pallidum.

Об авторах

Р Ф Хайруллин

ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава России

Email: khairullin@cnikvi.ru
к.х.н., старший научный сотрудник отдела лабораторной диагностики ИППП и дерматозов

А В Рунина

ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава России

лаборант-исследователь отдела лабораторной диагностики ИППП и дерматозов

К В Рог

ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава России

младший научный сотрудник отдела лабораторной диагностики ИППП и дерматозов

Н В Фриго

ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава России

д.м.н., заместитель директора по научно-образовательной работе

С В Ротанов

ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава России

д.м.н., доцент, врач Лабораторного центра

Список литературы

  1. Черешнев В.А., Патрушева Н.Б., Бейкин Я.Б. и др. Сифилис: Иммунитет и лабораторная диагностика. Екатеринбург: УрО РАН; 2006
  2. Соколовский Е., Фриго Н., Ротанов С. Руководство по лабораторной диагностике сифилиса в странах Восточной Европы. Вестн дерматол и венерол 2008; (1): 87—96
  3. Овчинников Н.М., Беднова В.Н., Делекторский В.В. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путем. М: Медицина; 1987
  4. Китаева Н.В., Фриго Н.В., Мелехина Л.Е. Актуальные проблемы сифилидологии. Современные технологии диагностики сифилитической инфекции. Вестн дерматол и венерол 2008; (5): 51—59
  5. Китаева Н.В., Фриго Н.В., Ротанов С.В., Хайруллин Р.Ф. Перспективы диагностического использования протеомных технологий в диагностике ИПППизаболеваний кожи. Вестн дерматол и венерол 2010; (4): 17—27
  6. Sambri V., Marangoni A., Simone M. et al. Evaluation of recomWell Treponema, a novel recombinant antigen-based enzyme-linked immunosorbent assay for the diagnosis of syphilis. Clin Microbiol Infect 2001; 7: 200—205
  7. Хайруллин Р.Ф., Ротанов С.В., Фриго Н.В., Белоусова А.В. Биоинформатический анализ специфических антигенов T. pallidum. Вестн дерматол и венерол 2012; (5): 56—64
  8. Carlson J.A., Dabiri G., Cribier B., Sell S. The im-munopathobiology of syphilis: the manifestations and course of syphilis are determined by the level of delayed-type hypersensitivity. Am J Dermatopathol 2011; 33: 433—460
  9. Cox D.L., Luthra A., Dunham-Ems S. et al. Surface immunolabeling and consensus computational framework to identify candidate rare outer membrane proteins of Treponema pallidum. Infect Immun 2010; 78: 5178—5194.
  10. Luthra A., Zhu G., Desrosiers D.C. et al. The transition from closed to open conformation of Treponema pallidum outer membrane-associated lipoprotein Tp0453 involves membrane sensing and integration by two amphipathic helices. J Biol Chem 2011; 286: 41656—41668.
  11. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 1970; 227: 680—685.
  12. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem 1976; 72: 248—254.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML

© Хайруллин Р.Ф., Рунина А.В., Рог К.В., Фриго Н.В., Ротанов С.В., 2013

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».