Получение и оценка клинической эффективности рекомбинантного антигена T. pallidum Tp0453 для диагностики сифилиса
- Авторы: Хайруллин РФ1, Рунина АВ1, Рог КВ1, Фриго НВ1, Ротанов СВ1
-
Учреждения:
- ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава России
- Выпуск: Том 89, № 6 (2013)
- Страницы: 73-79
- Раздел: Статьи
- URL: https://ogarev-online.ru/0042-4609/article/view/117095
- DOI: https://doi.org/10.25208/vdv609
- ID: 117095
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Цель. Получение нового рекомбинантного антигена T. pallidum Tp0453 и изучение эффективности его клинического использования при диагностике сифилиса. Материал и методы. Для получения целевого рекомбинантного антигена T. pallidum фрагмент ДНК возбудителя сифилиса, кодирующий белок Tp0453, был клонирован в вектор pET28а. Для наработки полученной генетической конструкции вектор вводили в штамм E. coli Top10, отбирая канамицин-устойчивые колонии. Специфичность клонирования подтверждена методом секвенирования по Сенгеру. Гетерологическую экспрессию рекомбинантного антигена T. pallidum проводили в штамме E. coli BL21 (DE3). Очистка рекомбинантного варианта белка T. pallidum Tp0453, содержащего дополнительную последовательность из 6 остатков гистидина на N-концевом участке молекулы, осуществлялась методом металл-хелатной хроматографии. Полученный гомогенный рекомбинантный белок T. pallidum Tp0453 был использован в качестве антигена для выявления специфических IgG к исследуемому белку в сыворотке больных сифилисом с использованием иммунологического биочипа. Результаты и заключение. Применение полученного рекомбинантного белка позволило выявить антитела к T. pallidum в сыворотке крови больных сифилисом (первичным, вторичным, скрытым ранним и поздним). При исследовании сыворотки крови, полученной от здоровых доноров, антитела не обнаруживались. На основании приведенных данных можно сделать вывод о возможности использования полученного рекомбинантного белка в качестве дополнительного антигена для диагностики сифилиса. Включение нового антигена в тест-системы для диагностики сифилиса (в формате иммуноферментного анализа, иммуноблоттинга или иммуночипа) расширяет возможности серологической диагностики данного заболевания за счет увеличения спектра определяемых антител к T. pallidum.
Ключевые слова
Полный текст
Открыть статью на сайте журналаОб авторах
Р Ф Хайруллин
ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава России
Email: khairullin@cnikvi.ru
к.х.н., старший научный сотрудник отдела лабораторной диагностики ИППП и дерматозов
А В Рунина
ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава Россиилаборант-исследователь отдела лабораторной диагностики ИППП и дерматозов
К В Рог
ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава Россиимладший научный сотрудник отдела лабораторной диагностики ИППП и дерматозов
Н В Фриго
ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава Россиид.м.н., заместитель директора по научно-образовательной работе
С В Ротанов
ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава Россиид.м.н., доцент, врач Лабораторного центра
Список литературы
- Черешнев В.А., Патрушева Н.Б., Бейкин Я.Б. и др. Сифилис: Иммунитет и лабораторная диагностика. Екатеринбург: УрО РАН; 2006
- Соколовский Е., Фриго Н., Ротанов С. Руководство по лабораторной диагностике сифилиса в странах Восточной Европы. Вестн дерматол и венерол 2008; (1): 87—96
- Овчинников Н.М., Беднова В.Н., Делекторский В.В. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путем. М: Медицина; 1987
- Китаева Н.В., Фриго Н.В., Мелехина Л.Е. Актуальные проблемы сифилидологии. Современные технологии диагностики сифилитической инфекции. Вестн дерматол и венерол 2008; (5): 51—59
- Китаева Н.В., Фриго Н.В., Ротанов С.В., Хайруллин Р.Ф. Перспективы диагностического использования протеомных технологий в диагностике ИПППизаболеваний кожи. Вестн дерматол и венерол 2010; (4): 17—27
- Sambri V., Marangoni A., Simone M. et al. Evaluation of recomWell Treponema, a novel recombinant antigen-based enzyme-linked immunosorbent assay for the diagnosis of syphilis. Clin Microbiol Infect 2001; 7: 200—205
- Хайруллин Р.Ф., Ротанов С.В., Фриго Н.В., Белоусова А.В. Биоинформатический анализ специфических антигенов T. pallidum. Вестн дерматол и венерол 2012; (5): 56—64
- Carlson J.A., Dabiri G., Cribier B., Sell S. The im-munopathobiology of syphilis: the manifestations and course of syphilis are determined by the level of delayed-type hypersensitivity. Am J Dermatopathol 2011; 33: 433—460
- Cox D.L., Luthra A., Dunham-Ems S. et al. Surface immunolabeling and consensus computational framework to identify candidate rare outer membrane proteins of Treponema pallidum. Infect Immun 2010; 78: 5178—5194.
- Luthra A., Zhu G., Desrosiers D.C. et al. The transition from closed to open conformation of Treponema pallidum outer membrane-associated lipoprotein Tp0453 involves membrane sensing and integration by two amphipathic helices. J Biol Chem 2011; 286: 41656—41668.
- Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 1970; 227: 680—685.
- Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem 1976; 72: 248—254.
Дополнительные файлы
