Inhibition of NRF2 transcription factor mediated by MIR-155 diminishes melanoma cell viability independently of redox status

Cover Page

Cite item

Full Text

Abstract

Redox-sensitive NRF2 transcription factor is a target gene of microRNA miR-155. miR-155 mimic was transfected in dacarbazine-resistant melanoma cells. NRF2 expression levels were down-regulated in miR-155-overexpressed cells independently of oxidative stress induced by hydrogen peroxide. NRF2 suppression was associated with a decrease of melanoma cells viability. As a result, miR-155-mediated NRF2 overexpression that regulate intensity of a cell antioxidant processes can be associated with cancer cell survival leading to drug resistance. NRF2 repression by miR-155 highlighted a potential for NRF2 down-regulation as an approach in anticancer therapy.

Full Text

Принятые сокращения: АФК — активные формы кислорода; ДМСО — диметлсульфоксид; МТТ — 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолий бромид; ПЦР-РВ — полимеразная цепная реакция в реальном времени; PBS — фосфатно-солевой раствор.

Активные формы кислорода (АФК) обладают двойственной ролью в канцерогенезе. С одной стороны, они стимулируют разрушение и последующую элиминацию трансформированных клеток, выполняя протективную роль в отношении развития злокачественных новообразований; кроме того, они могут индуцировать развитие клеточного старения и гибель клеток путем ферроптоза (Wu et al., 2019). С другой стороны, при хроническом воспалении АФК, выступая одной из первых линий защиты, обеспечивают окисление макромолекул, приводя к хромосомной нестабильности, появлению мутаций, изменению выраженности процессов пролиферации и дифференцировки (Seddon et al., 2023). В этой связи логично считать, что механизмы, регулирующие антиоксидантные процессы в клетках эукариот, играют существенную роль в канцерогенезе (Cheung, Vousden, 2022).

NRF2 — траснкрипционный фактор, функционирование которого связано с поддержанием редокс-статуса в клетке (Aramouni et al., 2023). Установлено, что NRF2 регулирует экспрессию ряда антиоксидантных молекул, в том числе каталазы, супероксиддисмутазы, глутатиона (Tossetta, Marzioni, 2023). В физиологических условиях NRF2 находится в связанном состоянии с белком Keap1, репрессирующим его активность, и подвергается убиквитин-зависимой деградации в протеасомах.

В условиях действия повреждающих факторов NRF2 высвобождается и транслоцируется в ядро клетки, где образует гетеродимеры с малыми белками Maf и связывается с так называемым антиоксидант-респонсивным элементом (ARE) (Bollong et al., 2018). Генами-мишенями NRF2 являются глутаматцистеинлигаза, тиоредоксинредуктаза 1, NAD(P)H-дегидрогеназа, глутатион-S-трансфераза, гены семейства множественной лекарственной устойчивости. Активация NRF2 приводит к повышению синтеза глутатиона, элиминации АФК, детоксикации ксенобиотиков, инициации транспорта лекарственных веществ в клетку (Milcovic et al., 2017).

Таким образом, сигнальный путь NRF2/Keap1/ARE относится к ключевым механизмам, активирующимся в условиях нарушенного редокс-статуса (Fan et al., 2017). В нормальных клетках посредством NRF2/Keap1/ARE происходит усиление транскрипции генов провоспалительных и антиоксидантных факторов, что снижает вероятность нестабильности генома (Camiña, Penning, 2022).

Усиление активности NRF2 в опухолевых клетках может быть связано с приобретением последними повышенной устойчивости к повреждающим факторам, в том числе к противоопухолевым лекарственным средствам. Пока нет однозначного ответа, носит ли функционирование NRF2 в опухолевых клетках про- или, напротив, антиканцерогенный характер. Описаны попытки целенаправленного воздействия на NRF2 с терапевтической целью при злокачественных новообразованиях, хотя весьма широкий спектр функций NRF2 являлся фактором, ограничивающим эту область исследований (Feng et al., 2023).

Выявлено, что длинная некодирующая РНК LINC00239 вызывает нестабильность комплекса NRF2/Keap1, приводя к NRF2-опосредованному усилению пролиферации и ингибированию ферроптоза клеток колоректального рака (Han et al., 2022). Вместе с тем для развития колоректального рака in vivo одной активации или ингибирования только NRF2 было недостаточно (Knatko et al., 2021).

Ряд микроРНК описан в качестве регуляторов экспрессии гена NFE2L2, кодирующего траснскрипционный фактор NRF2. NFE2L2 является геном-мишенью микроРНК miR-155 (Aksenenko et al., 2019; Liu et al., 2023). Обычно функционирование miR-155 в клетках меланомы рассматривается как оносупрессорное. Эктопическая экспрессия miR-155 вызывала снижение миграции и инвазии клеток меланомы (Li et al., 2019). Повышение miR-155 посредством трансфекции в клетки меланомы миметика miR-155 приводило к ингибированию метастазирования in vivo, что было опосредовано снижением уровня мишеневого гена — протеинкиназы WEE1, являющейся компонентом сигнального пути BRAF. Помимо уменьшения интенсивности метастазирования, при трансфекции в клетки меланомы миметика miR-155, происходило снижение их жизнеспособности (DiSano et al., 2019).

В этой связи целью данного исследования являлось определение эффекта трансфекции миметика микроРНК miR-155 на уровень мРНК гена NFE2L2 и жизнеспособности клеток меланомы, резистентных к дакарбазину, в условиях окислительного стресса.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА

Клеточные линии и условия культивирования. В эксперименте использовали клеточную линию меланомы B16, любезно предоставленную НИИ фундаментальной и клинической иммунологии (Новосибирск, Россия).

Клетки культивировали в среде DMEM (“ПанЭко”; Москва, Россия), содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) (HyClone, GmbH, Parsching, Австрия), 1% антибиотика/антимикотика (Gibco Life Technologies; Гранд-Айленд, США). Клетки культивировали в инкубаторе при 37 °С в атсмосфере 5% СО2 (Sanyo MSO-5AC, Осака, Япония).

Воздействие цитостатическим препаратом дакарбазин. Клетки меланомы В16 в концентрации 1 · 105 кл./мл обрабатывали 1.2 мМ раствором дакарбазина (Sigma-Aldrich, США), разведенного в ДМСО, и культивировали в течение 72 ч при 37 °C. Затем клетки промывали стерильным фосфатно-солевым буферным раствором (PBS) и культивировали дополнительно в питательной среде DMEM без дакарбазина в течение 48 ч, как было нами описано ранее (Esimbekova et al., 2023). В качестве контроля использовали исходные культуры клеток, обработанные 0.1% ДМСО.

МТТ-тест. Для оценки метаболической активности (жизнеспособности) клеток после воздействия миметиком микроРНК miR-155 выполняли МТТ-тест. Питательную среду отбирали из лунок, заменяли ее на свежую полную среду с МТТ (5 мг МТТ на 1 мл полной питательной среды) (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific Inc., Нидерланды). В каждую лунку добавляли по 135 мкл полной питальной среды и по 15 мкл концентрата МТТ. Далее клетки культивировали в условиях СО2-инкубатора в течение 4 ч. Затем отбирали жидкость из лунок, добавляли 200 мкл ДМСО и культивировали еще 10 мин. Оптическую плотность раствора в лунках определяли на спектрофотометре “Эфос-9305” (“Фотосистемы Швабе”, Россия) при длине волны 594 нм.

Трансфекция миметика микроРНК miR-155 в клетки меланомы В16. Трансфекцию миметика микроРНК miR-155 в клетки меланомы линий В16 осуществляли после воздействия цитостатическим препаратом дакарбазином в бессывороточной питательной среде. Для увеличения количества микроРНК miR-155 в клетках меланомы использовали коммерческий миметик микроРНК mmu-miR-155 mirVana™ miRNA mimics (№ 4464066; Invitrogen, США) и для отрицательного контроля — mirVana™ miRNA Mimic Negative Control 1 (№ 4464058; Invitrogen, США) в комплексе с реагентом для трансфекции Lipofectamine™ 3000 Transfection Reagent (Invitrogen, США).

В соответствии с прилагаемым протоколом производителя на 2 мл клеточной суспензии в концентрации 4 · 104 кл./мл использовали 12 мкл раствора миметика miR-155 или отрицательного контроля миметика и 6 мкл трансфектанта. После приготовления растворов Lipofectamine™ 3000 и миметика (негативного контроля), их смешивали и инкубировали 15 мин для проникновения миметика в липосферы. Конечная концентрация вводимых миметика микроРНК и отрицательного контроля в питательной среде составляла 250 нМоль/л. Трансфекцию осуществляли в течение 48 ч при температуре 37 °С и содержании углекислого газа 5% в условиях СО2-инкубатора.

Индукция окислительного стресса. Стресс вызывали добавлением в лунки планшета с клетками раствора перекиси водорода (Н2О2) в конечной концентрации 700 мкМ, как нами было описано ранее (Komina et al., 2012). Клетки предварительно обрабатывали дакарбазином в отдельной серии экспериментов с последующей трансфекцией негативного контроля к микроРНК miR-155 или миметика miR-155. После добавления Н2О2 в лунки планшета клетки культивировали в условиях СО2-инкубатора в течение 60 мин. Затем среду с Н2О2 заменяли на среду без Н2О2 и оставляли клетки на 24 ч в условиях СО2-инкубатора.

Выделение РНК и реакция обратной транскрипции. Выделение РНК из культуры клеток проводили с помощью набора реагентов diaGene (№ 3317; “Диаэм”, Россия) согласно протоколу производителя. Выделение тотальной РНК из клеток культур осуществляли после двукратной отмывки клеток от питательной среды стерильным PBS и дальнейшего лизиса клеток лизирующим раствором, входящим в состав набора. Полученные РНК-элюаты объемом 40 мкл использовали сразу для исследований, или сохраняли при температуре −70 °С.

Для синтеза первой цепи кДНК проводили реакцию обратной транскрипции с помощью набора MMLV RT kit (№ SK021; “Евроген”, Россия) согласно протоколу производителя. Каждый образец состоял из 3 мкл раствора полученной РНК и 1.5 мкл случайного декануклеотидного праймера или 5-кратного раствора специфичных праймеров из соответствующего набора для исследования экспрессии микроРНК/мРНК и 5.5 мкл реакционной смеси, состоящей из 1 мкл смеси дезоксинуклеозидтрифосфатов (dNTP), 1 мкл 1.4-дитиотреитола (DTT), 2 мкл 5-кратного раствора реакционного буфера, 0.5 мкл обратной транскриптазы MMLV и 1 мкл безнуклеазной воды. Образец инкубировали в термостате при 37 °C в течение 50 мин, а затем реакцию останавливали, нагревая образцы в течение 10 мин при 70 °C.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в реальном времени. ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ) выполняли на амплификаторе StepOneTM (Applied Biosystems, Сингапур) с протоколом термоциклирования: 1 цикл 50 °C — 2 мин, 95 °C — 10 мин, затем 40 циклов 95 °C — 15 с, 60 °C — 1 мин. Реакционная смесь для каждой реакции амплификации в общем объеме 20 мкл состояла из 2 мкл кДНК, 1 мкл исследуемых праймеров, 8 мкл 2.5-кратной реакционной смеси для ПЦР в присутствии ROX (Синтол, Россия), 1.2 мкл раствора MgCl2 и 6.8 мкл безнуклеазной воды.

Для определения экспрессии мРНК использовали набор для оценки уровня NRF2 (Mm00477784_m1; Applied Biosystems, США), для нормализации образцов в качестве эндогенных контролей определяли уровни мРНК HPRT1 (Mm00446968_m1; Applied Biosystems, США) и GAPDH (Mm99999915_g1; Applied Biosystems, США).

Используемые реагенты для определения экспрессии микроРНК: набор для детекции экспрессии микроРНК miR-155 (mmu-miR-204 PN4427975 002571; Applied Biosystems, США). В качестве эндогенных контролей использовали U6 snRNA (NR_004394 001973; Applied Biosystems, США) и snoRNA234 (AF357329 001234; Applied Biosystems, США).

Данные анализировали количественно с определением относительных уровней экспрессии исследуемых молекул при помощи метода ∆∆Ct (Livak, Schmittgen, 2001). Для этого относительные уровни экспрессии микроРНК и мРНК по каждому эндогенному контролю рассчитывали по формуле 2–ÄÄCT, где СТ — средние пороговые циклы образцов, при которых кривая флуоресценции ROX пересекала заданную линию фона, а ÄCT определяли разницей СТ исследуемого маркера и СТ эндогенного нормирующего контроля для данного маркера.

Кроме нормализации по эндогенному контролю осуществляли нормализацию по эталонному образцу. ÄÄCT — разница ÄCT образца после воздействия и ÄCT интактного образца без какого-либо воздействия. Для каждой исследуемой пробы методом ПЦР-РВ выполняли два технологических повтора.

Статистическая обработка. Все эксперименты по клеточному культивированию проводили в трех повторностях. Полученные результаты представлены в виде среднего значения из трех повторов и его стандартной ошибки. Различия считали как статистически значимыми при Р < 0.05. Достоверность различий оценивали на основе критерия Краскелла–Уоллеса с дальнейшим сравнением попарно с помощью критерия Манна–Уитни с помощью программного обеспечения Statistica 7.0 (StatSoft, Россия). Статистические результаты получены с использованием GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, USA).

РЕЗУЛЬТАТЫ

В клетках меланомы В16, подвергнутых действию дакарбазина с последующей трансфекцией миметика микроРНК miR-155 наблюдали повышение уровня miR-155 по сравнению с клетками, подвергнутыми действию ДМСО (Р = 0.0495), дакарбазина (Р = 0.0495), дакарбазина с последующей трансфекцией негативного контроля (Р = 0.0495) (рис. 1).

 

Рис. 1. Уровни экспрессии микроРНК miR-155 в клетках меланомы В16 после действия 0.1% ДМСО, 1.2 мМ дакарабазина, дакарбазина с последующей трансфекцией негативного контроля имитатора miR-155, дакарабазина с последующей трансфекцией миметика микроРНК miR-155 до окислительного стресса (а) и через 24 ч после добавлении 700 мкМ Н2О2 (б). По результатам ПЦР-РВ; (*) — различия достоверны при Р = 0.0495 (критерий Краскелла–Уоллеса)

 

В клетках меланомы В16 на фоне оверэкспрессии микроРНК miR-155 было обнаружено снижение уровня мРНК NFE2L2 по сравнению с клетками, подвергнутыми действию ДМСО, дакарбазина и дакарбазина с последующей трансфекцией негативного контроля (во всех случаях Р = 0.0495). Помимо этого, уровень экспрессии NFE2L2 снижался в клетках меланомы В16 после действия дакарбазина по сравнению с клетками, подвергнутыми воздействию ДМСО (Р = 0.0495) (рис. 2а).

 

Рис. 2. Уровни экспрессии NFE2L2, кодирующего транскрипционный фактор NRF2, в клетках меланомы В16, подвергнутых воздействию ДМСО, дакарабазина, дакарбазина с последующей трансфекцией негативного контроля, дакарабазина с последующей трансфекцией миметика микроРНК miR-155 в отсутствие Н2О2 (а) и после добавлении 700 мкМ Н2О2 (б). (*) — Р = 0.0495 (критерий Краскелла–Уоллеса)

 

При добавлении в культуральную среду Н2О2 для индукции окислительного стресса через 24 ч после отмывки уровень экспрессии NFE2L2 снижался в клетках, подвергнутых действию дакарбазина с последующей трансфекцией миметика miR-155 по сравнению со всеми тремя контрольными группами — клетками с добавлением ДМСО, дакарбазина и дакарбазина в сочетании с негативным контролем (во всех случаях Р = 0.0495) (см. рис. 2б).

Стоит отметить, что уровень экспрессии NFE2L2 после действия дакарбазина снижался при индукции в клетках окислительного стресса, а дополнительная трансфекция миметика miR-155 не оказывала влияния на уровни экспрессии гена транскрипционного фактора NRF2 (см. рис. 2).

При оценке жизнеспособности клеток меланомы В16 вне зависимости от редокс-статуса, трансфекция миметика микроРНК вызывала снижение жизнеспособности клеток (Р = 0.0495). Помимо этого, в условиях отсутствия окислительного стресса трансфекция негативного контроля также вызывала уменьшение жизнеспособности клеток (Р = 0.0495). Этот эффект нивелировался индукцией окислительного стресса (рис. 3).

 

Рис. 3. Жизнеспособность клеток меланомы В16, подвергнутых воздействию ДМСО, дакарабазина, дакарбазина с последующей трансфекцией негативного контроля, дакарабазина с последующей трансфекцией миметика микроРНК miR-155 в отсутствие Н2О2 (а) и после добавлении 700 мкМ Н2О2 (б). Оценка оптической плотности продукта реакции в МТТ-тесте. (*) — Р = 0.0495 (критерий Краскелла–Уоллеса)

 

Визуально морфология клеток меланомы В16 изменялась после действия дакарбазина: клетки приобретали веретенообразную форму (рис. 4б, 4е), что может быть связано с транскриптомным перепрограммированием под действием дакарбазина и последующим изменением процессов межклеточной коммуникации (Esimbekova et al., 2023). Трансфекция антисмысловых олигонуклеотидов в дальнейшем не влияла на морфологию клеток (рис. 4 в–г, 4ж–з).

 

Рис. 4. Культура клеток меланомы линии B16 после воздействия ДМСО (а), дакарабазина (б), дакарбазина с последующей трансфекцией негативного контроля (в), дакарабазина с последующей трансфекцией миметика микроРНК miR-155 (г) в условиях отсутствия (а–г) и после добавлении 700 мкМ Н2О2 в тех же группах (е–ж)

 

ОБСУЖДЕНИЕ

Терапия злокачественных новообразований остается малоэффективной в отношении диссеминированных форм опухолей, что поддерживает актуальность исследования молекулярных механизмов их лекарственной устойчивости, поиска новых стратегий противоопухолевого воздействия.

Дакарбазин является химиотерапевтическим агентом, используемым в качестве базового средства для лечения меланомы кожи. Он представляет собой алкилирующий агент, индуцирующий повреждение ДНК и, как предполагалось, последующую остановку клеточного цикла с развитием апоптоза. К сожалению, эффективность дакарбазина незначительна, а механизмы низкой эффективности до сих пор остаются недостаточно понятными.

Вместе с тем известно, что химиотерапевтические средства индуцируют в опухолевых клетках окислительный стресс (Wang et al., 2021), что должно снижать их жизнеспособность. Безусловно, антиоксидантные системы клеток в таких условиях, выполняя цитопротекторную роль, способствуют выживаемости опухолевых клеток.

Целью представленной работы было miR-155-опосредованное снижение экспрессии редокс-чувствительного транскрипционного фактора NRF2 в клетках меланомы в условиях окислительного стресса для оценки возможного антиканцерогенного действия miR-155.

Для этого в клетки меланомы, подвергнутые действию дакарбазина и сохранившие жизнеспособность (Esimbekova et al., 2023), трансфецировали миметик микроРНК miR-155. В дальнейшем клетки подвергали действию перекиси водорода, как было описано нами ранее (Komina et al., 2012), с последующим определением уровня miR-155, ее гена-мишени NFE2L2, кодирующего трансрипционный фактор NRF2, и оценкой жизнеспособности клеток.

Оверэкспрессию микроРНК miR-155 осуществляли в клетках меланомы посредством трансфекции миметика на основе олигонуклеотидов. Эффективность трансфекции оценивали по уровню miR-155. Только в клетках с трансфицированным миметиком miR-155 наблюдали повышение ее уровня, что говорит об успешной трансфекции олигонуклеотидов.

Помимо этого, в клетках с трансфецированным имитатором miR-155 отмечали снижение уровня ее гена-мишени NFE2L2. Это косвенно еще раз указывает на эффективность оверэкспрессии miR-155, подтверждает, что NRF2 является функциональной мишенью miR-155. Стоит отметить, что в клетках, подвергнутых воздействию только дакарбазином, уровень NFE2L2 также снижался, хотя и не столь значимо. Данный факт может быть свидетельством способности дакарбазина модулировать уровни экспрессии NFE2L2.

Понижение уровня NRF2 в клетках с трансфецированным миметиком miR-155 соответствовало снижению жизнеспособности клеток меланомы. Стоит отметить, что в данном случае трансфекцию миметика miR-155 осуществляли в клетки меланомы, сохранившие жизнеспособность после воздействия дакарбазином.

Как следует из наших предыдущих исследований, доля таких клеток составляла 50% (Lapkina et al., 2023). По всей видимости, miR-155-опосредованное снижение уровня NRF2 вызывает угнетение жизнеспособности дакарбазин-резистентных клеток меланомы.

Стоит отметить, что повышение уровня NRF2 при этом не происходило в условиях индукции окислительного стресса. Последнее также может указывать на выраженное супрессивное действие miR-155 в отношении NRF2.

Таким образом, в клетках меланомы NRF2 является функциональной мишенью микроРНК miR-155. miR-155, действуя каноническим путем, вероятнее всего, связывается с мРНК NRF2 в комплементарном участке 3’-нетранслируемой области, приводя к деградации последней, что и вызывает снижение соответствующего уровня экспрессии.

Сочетанное применение дакарбазина с миметиком miR-155 может вызывать NRF2-опосредованное снижение жизнеспособности клеток меланомы. Последнее может быть применено для преодоления лекарственной устойчивости опухолевых клеток, обусловленной повышением активности в них антиоксидантных систем.

ФИНАНСИРОВАНИЕ РАБОТЫ

Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (проект № 19-15-00110; https://rscf.ru/project/19-15-00110/).

СОБЛЮДЕНИЕ ЭТИЧЕСКИХ СТАНДАРТОВ

Экспериментов с участием животных или людей авторы не проводили.

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

×

About the authors

V. A. Kutsenko

Voino-Yasenetsky Krasnoyarsk State Medical University

Email: tatyana_ruksha@mail.ru
Russian Federation, Krasnoyarsk

D. A. Dashkova

Voino-Yasenetsky Krasnoyarsk State Medical University

Email: tatyana_ruksha@mail.ru
Russian Federation, Krasnoyarsk

T. G. Ruksha

Voino-Yasenetsky Krasnoyarsk State Medical University

Author for correspondence.
Email: tatyana_ruksha@mail.ru
Russian Federation, Krasnoyarsk

References

  1. Лапкина Е.З., Есимбекова А.Р., Беленюк В.Д., Савченко А.А., Рукша Т.Г. 2022. Распределение клеток меланомы В16 по фазам клеточного цикла под воздействием дакарбазина. Цитология. Т. 64. № 6. С. 573. (Lapkina E.Z., Esimbekova A.R., Beleniuk V.D., Savchenko A.A., Ruksha T.G. 2023. The distribution of B16 melanoma cells in cell-cycle phases under the influence of dacarbazine. Cell Tiss. Biol. V. 17. P. 161.)
  2. Aksenenko M.B., Palkina N.V., Sergeeva O.N., Sergeeva Yu.E., Kirichenko A.K., Ruksha T.G. 2019. miR-155 overexpression is followed by downregulation of its target gene, NFE2L2, and altered pattern of VEGFA expression in the liver of melanoma B16-bearing mice at the premetastatic stage. Int. J. Exp. Pathol. V. 100. P. 311.
  3. Aramouni K., Assaf R., Shaito A., Fardoun M., Al-Asmakh M., Sahebkar A., Eid A.H. 2023. Biochemical and cellular basis of oxidative stress: Implications for disease onset. J. Cell Physiol. V. 238. P. 1951. https://doi.org/ 10.1002/jcp.31071
  4. Bollong M.J., Lee G., Coukos J.S., Yun H., Zambaldo C., Chang J.W., Chin E.N., Ahmad I., Chatterjee A.K., Lairson L.L., Schultz P.G., Moellering R.E. 2018. A metabolite-derived protein modification integrates glycolysis with KEAP1-NRF2 signalling. Nature. V. 562. P. 600. https://doi.org/10.1038/s41586-018-0622-0
  5. Camiña N., Penning T.M. 2022. Genetic and epigenetic regulation of the NRF2-KEAP1 pathway in human lung cancer. Br. J. Cancer. V. 126. P. 1244. https://doi.org/10.1038/s41416-021-01642-0
  6. Cheung E.C., Vousden K.H. 2022. The role of ROS in tumour development and progression. Nat. Rev. Cancer. V. 22. P. 280. https://doi.org/ 10.1038/s41568-021-00435-0
  7. DiSano J.A., Huffnagle I., Gowda R., Spiegelman V.S., Robertson G.P., Pameijer C.R. 2019. Loss of miR-155 upregulates WEE1 in metastatic melanoma. Melanoma Res. V. 29. P. 216. https://doi.org/10.1097/CMR.0000000000000545
  8. Esimbekova A.R., Palkina N.V., Zinchenko I.S., Belenyuk V.D., Savchenko A.A., Sergeeva E.Y., Ruksha T.G. 2023. Focal adhesion alterations in G0-positive melanoma cells. Cancer Med. V. 12. P. 7294. https://doi.org/10.1002/cam4.5510
  9. Fan Z., Wirth A.K., Chen D., Wruck C.J., Rauh M., Buchfelder M., Savaskan N. 2017. Nrf2-Keap1 pathway promotes cell proliferation and diminishes ferroptosis. Oncogenesis. V. 6. P. 371. https://doi.org/10.1038/oncsis.2017.65
  10. Feng Q., Xu X., Zhang S. 2023. Nrf2 protein in melanoma progression, as a new means of treatment. Pigment Cell Melanoma Res. https://doi.org/10.1111/pcmr.13137
  11. Han Y., Gao X., Wu N., Jin Y., Zhou H., Wang W., Liu H., Chu Y., Cao J., Jiang M., Yang S., Shi Y., Xie X., Chen F., Han Y., et al., 2022. Long noncoding RNA LINC00239 inhibits ferroptosis in colorectal cancer by binding to Keap1 to stabilize Nrf2. Cell Death Dis. V. 13. P. 742. https://doi.org/10.1038/s41419-022-05192-y
  12. Knatko E.V., Castro C., Higgins M., Zhang Y., Honda T., Henderson C.J., Wolf C.R., Griffin J.L., Dinkova-Kostova A.T. 2021. Nrf2 activation does not affect adenoma development in a mouse model of colorectal cancer. Commun. Biol. V. 4. P. 1081. https://doi.org/10.1038/s42003-021-02552-w
  13. Komina A.V., Korostileva K.A., Gyrylova S.N., Belonogov R.N., Ruksha T.G. 2012. Interaction between single nucleotide polymorphism in catalase gene and catalase activity under the conditions of oxidative stress. Physiol. Res. V. 61. P. 655. https://doi.org/10.33549/physiolres.932333
  14. Li H., Song J.B., Chen H.X., Wang Q.Q., Meng L.X., Li Y. 2019. MiR-155 inhibits proliferation, invasion and migration of melanoma via targeting CBL. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci. V. 23. P. 9525. https://doi.org/10.26355/eurrev_201911_19447
  15. Liu G., He L., Yang X., Tang L., Shi W., She J., Wei J. 2023. MicroRNA-155-5p aggravates adriamycin-induced focal segmental glomerulosclerosis through targeting Nrf2. Nephron. V. 147. P. 108. https://doi.org/10.1159/000525233
  16. Milkovic L., Zarkovic N., Saso L. 2017. Controversy about pharmacological modulation of Nrf2 for cancer therapy. Redox Biol. V. 12. P. 727. https://doi.org/10.1016/j.redox.2017.04.013
  17. Seddon A.R., Das A.B., Hampton M.B., Stevens A.J. Site-specific decreases in DNA methylation in replicating cells following exposure to oxidative stress. Hum. Mol. Genet. 2023. V. 32. P. 632. https://doi.org/0.1093/hmg/ddac232
  18. Tossetta G., Marzioni D. 2023. Targeting the NRF2/KEAP1 pathway in cervical and endometrial cancers. Eur. J. Pharmacol. V. 941. P. 175503. https://doi.org/10.1016/j.ejphar.2023.175503
  19. Wang J. Sun Y., Zhang X., Cai H., Zhang C., Qu H., Liu L., Zhang M., Fu J., Zhang J., Wang J., Zhang G. 2021. Oxidative stress activates NORAD expression by H3K27ac and promotes oxaliplatin resistance in gastric cancer by enhancing autophagy flux via targeting the miR-433-3p. Cell Death Dis. V. 12. P. 90. https://doi.org/10.1038/s41419-020-03368-y
  20. Wu J., Minikes A.M., Gao M., Bian H., Li Y., Stockwell B.R., Chen Z.N., Jiang X. 2019. Intercellular interaction dictates cancer cell ferroptosis via NF2-YAP signalling. 2019. Nature. V. 572. P. 402. https://doi.org/10.1038/s41586-019-1426-6

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download
2. Fig. 1. Expression levels of miR-155 microRNA in B16 melanoma cells after the action of 0.1% DMSO, 1.2 mM dacarbazine, dacarbazine followed by transfection of miR-155 mimic negative control, dacarbazine followed by transfection of miR-155 microRNA mimetic before oxidative stress (a) and 24 h after addition of 700 μM H2O2 (b). According to PCR-RV results; (*) - differences are reliable at P = 0.0495 (Kraskell-Wallace test)

Download (251KB)
Indexing metadata
3. Fig. 2. Expression levels of NFE2L2, encoding the NRF2 transcription factor, in B16 melanoma cells exposed to DMSO, dacarabazine, dacarbazine followed by transfection of negative control, dacarabazine followed by transfection of miR-155 microRNA mimetic in the absence of H2O2 (a) and after addition of 700 μM H2O2 (b). (*) - P = 0.0495 (Kraskell-Wallace test)

Download (228KB)
Indexing metadata
4. Fig. 3. Viability of B16 melanoma cells exposed to DMSO, dacarabazine, dacarbazine followed by transfection of negative control, dacarabazine followed by transfection of miR-155 microRNA mimetic in the absence of H2O2 (a) and after addition of 700 μM H2O2 (b). Evaluation of the optical density of the reaction product in the MTT assay. (*) - P = 0.0495 (Kraskell-Wallace test)

Download (202KB)
Indexing metadata
5. Fig. 4. Culture of melanoma cell line B16 after exposure to DMSO (a), dacarbazine (b), dacarbazine followed by transfection of negative control (c), dacarbazine followed by transfection of miR-155 microRNA mimetic (d) in absence conditions (a-d) and after addition of 700 μM H2O2 in the same groups (f-h)

Download (671KB)
Indexing metadata

Copyright (c) 2024 Russian Academy of Sciences

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».