Иммунофенотипирование популяции культивируемых клеток слизистой соединительной ткани (вартонова студня) пуповины человека

Актуальность. На фоне множества способов замещения дефектов при посттравматических повреждениях все более широкое распространение в медицинской практике получают приемы репарации поврежденных тканей, основанные на методах, использующих продукты тканевой инженерии и культур искусственно культивируемых клеток человека. В литературе сообщается о слабой иммуногенной активности тканей пуповины человека, что делает эти клетки перспективными компонентами продуктов регенеративной медицины. В связи с возможной спонтанной трансформацией клеток в процессе культивирования и ошибками при отборе экспланта необходимо достоверное определение фенотипа клеток, полученных в результате эксплантации ткани и дальнейшего их культивирования. Таким образом, специфика получения мультипотентных мезенхимальных клеток из слизистой соединительной ткани пуповины человека, называемой также вартонов студень, требует достоверной идентификации типа полученных клеток.

Цель. Выявление наличия мезенхимальных стволовых клеток в клеточной популяции, полученной из слизистой соединительной ткани пуповины человека с использованием иммуноферментного маркирования.

Материал и методы. В исследовании использовали методы культивирования клеток, проточной цитофлуориметрии, иммуноцитохимии для определения поверхностных и внутриклеточных маркеров мезенхимальных стволовых клеток.

Результаты. При проведении работы по идентификации клеток популяции, полученной при культивировании эксплантов из слизистой соединительной ткани пуповины человека, установлена неоднородность типа клеток, составляющих популяцию. Большинство из них несут флуоресцентные метки CD45, CD73, CD34, CD29, CD90, CD44, CD105, что согласуется с иммунофенотипом мезенхимальных стволовых клеток, определенным Международным обществом по клеточной терапии. Соотношение примененных маркеров позволяет отнести популяцию клеток, полученную методом прямой эксплантации фрагментов слизистой соединительной ткани, к мезенхимальным стволовым клеткам. Визуальный контроль подтвердил локализацию меченных антител на поверхности культивируемых клеток. Также показано, что в полученной культуре отсутствуют мышечные клетки кровеносных сосудов.

Заключение. В результате экспериментов по идентификации клеток, полученных при эксплантации фрагментов слизистой соединительной ткани, и дальнейшего их культивирования, методом иммунофлуоресцентной цитофотометрии установлена их принадлежность к мезенхимальным стволовым клеткам.