Отправить статью по E-mail Получение и характеризация псевдовирусов SARS-CoV-2
- Авторы: Рудометова Н.Б.1, Щербаков Д.Н.1, Карпенко Л.И.1
-
Учреждения:
- Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора
- Выпуск: Том 22, № 2 (2022)
- Страницы: 249-253
- Раздел: Материалы конференции
- URL: https://ogarev-online.ru/MAJ/article/view/108600
- DOI: https://doi.org/10.17816/MAJ108600
- ID: 108600
Цитировать
Открытый доступ
Доступ предоставлен
Только для подписчиков
Аннотация
Обоснование. Технология псевдовирусов — универсальный и ценный инструмент для фундаментальных и прикладных вирусологических исследований. Псевдотипированные вирусы обеспечивают тот же механизм проникновения в клетку, что и SARS-CoV-2, поэтому они широко используются для изучения механизма проникновения вируса, клеточного тропизма, а также для проведения анализа вируснейтрализации.
Цель работы — получить псевдотипированные вирусы SARS-CoV-2 и оценить их трансдуцирующую активность.
Материалы и методы. С помощью методов генетической инженерии получали генетическую конструкцию, несущую ген гликопротеина S SARS-CoV-2, а также репортерную плазмиду pLenti-Luc-GFP, кодирующую гены зеленого флуоресцентного белка (GFP) и люциферазы светлячка. С помощью трансфекции эукариотических клеток были наработаны псевдовирусные частицы. Трансдуцирующая активность псевдовирусных частиц, экспонирующих на своей поверхности гликопротеин S SARS-CoV-2, изучена с использованием культур клеток HEK293, HEK293-hACE2 и HEK293-hACE2-TMPRSS2 (t).
Результаты. На основе лентивирусной платформы второго поколения получены псевдовирусы, экспонирующие на своей поверхности гликопротеин S SARS-CoV-2. Установлено, что псевдовирусы более эффективно проникают в клетки HEK293-hACE2-TMPRSS2, чем в HEK293-hACE2. Показано, что псевдовирусы чувствительны к нейтрализации рекомбинантными моноклональными антителами, которые взаимодействуют с рецептор-связывающим доменом (RBD) гликопротеина S SARS-CoV-2.
Заключение. Полученные и охарактеризованные в данной работе псевдовирусы могут быть использованы как для поиска ингибиторов проникновения SARS-CoV-2 в клетки-мишени, так и для оценки эффективности разрабатываемых моноклональных антител и вакцин против SARS-CoV-2.
Ключевые слова
Полный текст
Открыть статью на сайте журналаОб авторах
Надежда Борисовна Рудометова
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора
Автор, ответственный за переписку.
Email: nadenkaand100@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-1684-9071
SPIN-код: 5283-6608
канд. биол. наук, научный сотрудник
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская областьДмитрий Николаевич Щербаков
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора
Email: dnshcherbakov@gmail.com
ORCID iD: 0000-0001-8023-4453
SPIN-код: 9616-0933
Scopus Author ID: 37027118800
канд. биол. наук, ведущий научный сотрудник
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская областьЛариса Ивановна Карпенко
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора
Email: karpenko@vector.nsc.ru
ORCID iD: 0000-0003-4365-8809
SPIN-код: 2026-5992
Scopus Author ID: 7005000410
д-р биол. наук, доцент, ведущий научный сотрудник
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская областьСписок литературы
- Schmidt F., Weisblum Y., Muecksch F. et al. Measuring SARS-CoV-2 neutralizing antibody activity using pseudotyped and chimeric viruses // J. Exp. Med. 2020. Vol. 217, No. 11. P. e2020118. doi: 10.1084/jem.20201181
- Chen M., Zhang X.E. Construction and applications of SARS-CoV-2 pseudoviruses: a mini review // Int. J. Biol. Sci. 2021. Vol. 17, No. 6. P. 1574–1580. doi: 10.7150/ijbs.59184
- Neerukonda S.N., Vassell R., Herrup R. et al. Establishment of a well-characterized SARS-CoV-2 lentiviral pseudovirus neutralization assay using 293T cells with stable expression of ACE2 and TMPRSS2 // PLoS One. 2021. Vol. 16, No. 3. P. 1–19. doi: 10.1371/journal.pone.0248348
- Yu J., Li Z., He X. et al. Deletion of the SARS-CoV-2 spike cytoplasmic tail increases infectivity in pseudovirus neutralization assays // J. Virol. 2021. Vol. 95, No. 11. P. 1–14. doi: 10.1128/JVI.00044-21
- Li Q., Liu Q., Huang W. et al. Current status on the development of pseudoviruses for enveloped viruses // Rev. Med. Virol. 2018. Vol. 28, No. 1. P. e1963. doi: 10.1002/rmv.1963
- Zhang H., Penninger J.M., Li Y. et al. Angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) as a SARS-CoV-2 receptor: Molecular mechanisms and potential therapeutic target // Intensive Care Med. 2020. Vol. 46, No. 4. P. 586–590. doi: 10.1007/s00134-020-05985-9
- Hoffmann M., Kleine-Weber H., Schroeder S. et al. SARS-CoV-2 cell entry depends on ACE2 and TMPRSS2 and is blocked by a clinically proven protease inhibitor // Cell. 2020. Vol. 181, No. 2. P. 271–280.e8. doi: 10.1016/j.cell.2020.02.052
Дополнительные файлы
