ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ПРОЯВЛЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ДОТ-ИММУНОАНАЛИЗА В АВТОНОМНОМ НАБОРЕ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ОРТОПОКСВИРУСОВ


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель работы - создание чувствительного, быстрого и простого в применении иммунохимического теста для выявления ортопоксвирусов в формате «у постели больного». Задачами исследования являлись: отработка технологии приготовления и применения проявителя конъюгатов коллоидного золота в автономных диагностических системах на основе плоских белковых матриц, а также апробация этой технологии при выявлении вируса осповакцины. Проведена оценка качества доступных сортов реагентов (метола, лимонной кислоты и нитрата серебра) для изготовления проявляющей системы; отобраны наиболее пригодные варианты. Отработана технология приготовления проявителя, включающего сухой компонент в виде таблеток (3,5-4 мг), содержащих метол и лимонную кислоту в соотношении 2:3, и жидкий компонент - 0,4% раствор нитрата серебра. Для повышения контрастности и стабильности оптических сигналов предложено использовать обработку проявленной белковой матрицы щелочным раствором тиомочевины. Применение двухкомпонентного проявителя позволяет проводить выявление вируса осповакцины во внелабораторных условиях с чувствительностью 5,4 × 104 БОЕ/мл.

Об авторах

Александр Георгиевич Полтавченко

ФБУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

доктор биол. наук, вед. науч. сотр. отдела разработки и производства средств диагностики вирусных заболеваний ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора 630559, Новосибирская область, Россия, р.п. Кольцово

Анна Васильевна Ерш

ФБУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

канд. биол. наук, науч. сотр. лаб. иммунохимической диагностики ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора 630559, Новосибирская область, Россия, р.п. Кольцово

Мамедьяр Шакирович Азаев

ФБУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Email: azaev@vector.nsc.ru
доцент, доктор биол. наук, зав. отделом научно-методической подготовки персонала по работе с возбудителями особо опасных инфекций ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора 630559, Новосибирская область, Россия, р.п. Кольцово

Павел Владимирович Филатов

ФБУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

канд. биол. наук, науч. сотр. лаб. иммунохимической диагностики ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора 630559, Новосибирская область, Россия, р.п. Кольцово

Список литературы

  1. Rimoina W., Graham B.S. Whither monkeypox vaccination. Vaccine. 2011; v. 295, p. 60-4. DOI: 10.1016/j.vaccine.2011.09.004' target='_blank'>http://dx.doi: 10.1016/j.vaccine.2011.09.004
  2. Бондарев В.П., Терентьев А.И., Мельников С.А., Бондарева Т.А. Внедрение таблетированной оспенной вакцины «ТЭОВАК» в серийное производство для обеспечения биологической безопасности населения Российской Федерации. Проблемы особо опасных инфекций. 2010; вып. 104, с. 66-8.
  3. Максютов Р.А. Комплексный подход к видоспецифичной детекции вируса оспы коров. Проблемы особо опасных инфекций. 2016, вып. 4, c. 60-3.
  4. Pulford D., Meyer H., Brightwell G., Damon I., Kline R., Ulaeto D. Amplification refractory mutation system PCR assays for the detection of variola and Orthopoxvirus/ J. Virol. Meth. 2004. v. 117: 81-90. DOI: 10.1016/j.jviromet.2004.01.001' target='_blank'>http://dx.doi: 10.1016/j.jviromet.2004.01.001
  5. Probst A., Besse A., Favry E., Imbert G., Tanchou V., Castelli F.A., Maillere B. Human CD4 T cell epitopes selective for Vaccinia versus Variola virus. Mol. Immunol. 2013, v. 53: p. 453- 9. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.molimm.2012.10.011
  6. Chen L., Wang H., Guo T., Xiao C., Liu L. et al. A rapid point-of-care test for dengue virus-1 based on a lateral flow assay with a near-infrared fluorescent dye. J. Immunol. Meth. 2018, v. 456: p. 23-7. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jim.2018.02.005
  7. Ерш А.В., Полтавченко А.Г., Пьянков С.А., Агафонов А.П., Кривенчук Н.А., Буторин Д.В. Метод комплексной оценки гуморального иммунитета к детским вакциноуправляемым вирусным инфекциям. Вопросы вирусологии. 2015, 60(1): 45-9
  8. Poltavchenko A.G., Nechitaylo O.V., Filatov P.V., Ersh A.V., Gureyev V.N. Multiplex method for initial complex testing of antibodies to blood transmitted diseases agents. J. Virol. Meth. 2016; vol. 236: 231-6. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.jviromet.2016.08.003
  9. Полтавченко А.Г., Ерш А.В., Крупницкая Ю.А. Выбор системы детекции для мультиплексного дот-иммуноанализа антител. Клиническая лабораторная диагностика. 2016, 61(4): 229-33.
  10. Скоупс Р. Методы очистки белков. Пер с англ. М.; Мир, 1985.
  11. Poltavchenko A.G., Zaytzev B.N., Ersh A.V., Korneev D.V., Taranov O.S., Filatov P.V., Nechitaylo O.V. The selection and optimization of the detection system for self-contained multiplexed dot-immunoassay. Journal of Immunoassay and Immunochemistry. 2016; 37(5): 540-54. DOI: http://dx.doi.:10.1080/15321819.2016.1174134
  12. Poltavchenko A.G., Zaitsev B.N., Ersh A.V., Taranov O.S., Korneev D.V., Nikonov A.M. Selection of Substrate Material for Protein Matrices. Protection of Metals and Physical Chemistry of Surfaces. 2016; 52(2): 301-7. DOI: http://dx.doi: 10.1134/S2070205116020234
  13. Kebler L.F. The Tablet Industry - Its Evolution and Present Status: The Composition of Tablets and Methods of Analysis. Journal of the American Pharmaceutical Association. Cambridge, MA: Elsevier, 1914; 3(6): 820-48. doi: 10.1002/jps.3080030614.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© ООО "Эко-вектор", 2019


 


Согласие на обработку персональных данных

 

Используя сайт https://journals.rcsi.science, я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных») даю согласие на обработку персональных данных на этом сайте (текст Согласия) и на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика» (текст Согласия).