Тест-система для выявления IgG-антител к вирусу гепатита Е (Hepeviridae, Orthohepevirus, Orthohepevirus A) методом линейного иммуноанализа

Обложка

Цитировать

Полный текст

Аннотация

Введение. Эффективность методов серодиагностики гепатита Е варьирует в широких пределах, поэтому рекомендуется комбинированное использование тестов различных форматов.
Цель исследования – разработка тест-системы для выявления IgG-антител к вирусу гепатита Е (ВГЕ) в сыворотке крови человека методом линейного иммуноанализа (ЛИА).
Материал и методы. Образцы сывороток крови больных гепатитами и условно здоровых лиц типировали с применением коммерческих иммуноферментных тест-систем на IgG-антитела к возбудителям вирусных гепатитов и иных инфекций, вызывающих патологию печени. В ЛИА применяли рекомбинантные антигены ORF2 и ORF3 ВГЕ 1-го и 3-го генотипов. В качестве тест-системы сравнения использовали набор реагентов «RecomLine HEV IgG/IgM» (Mikrogen GmbH, Германия).
Результаты. Разработана первая отечественная тест-система «Блот-ВГЕ», предназначенная для выявления IgG-антител к индивидуальным белкам ВГЕ в сыворотке крови человека методом ЛИА. Антигенная основа представлена полосками нитроцеллюлозной мембраны с иммобилизованными на ней в виде дискретных линий рекомбинантными антигенами, содержащими С-концевые фрагменты белков ORF2 (406–660 а.о.), полноразмерные последовательности белков ORF3 (1–113 а.о.) ВГЕ 1-го и 3-го генотипов, и контрольными антигенами. Конъюгат – меченные пероксидазой хрена моноклональные антитела мыши к IgG человека, раствор хромогена содержит 3,3’,5,5’-тетраметилбензидин. Предусмотрен визуальный и цифровой учёт результатов. Аналитическая чувствительность тест-системы составила 0,625 МЕ/мл для антигенов ORF2 и 2,5 МЕ/мл для антигенов ORF3. Показано, что эндогенные интерференты не влияют на результаты анализа и отсутствуют перекрёстные реакции с антителами к возбудителям гепатитов иной этиологии. Чувствительность тест-системы в сравнении с набором «RecomLine HEV IgG/IgM» составила 92%, специфичность – 97%. Определён срок её годности в заданных условиях хранения – 12 мес.
Заключение. Разработана тест-система для подтверждения результатов иммуноферментного анализа в лабораторной диагностике гепатита Е.

Об авторах

Г. И. Алаторцева

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»

Автор, ответственный за переписку.
Email: alatortseva@gmail.com
ORCID iD: 0000-0001-9887-4061

Алаторцева Галина Ивановна, канд. биол. наук, вед. науч. сотр., зав. лабораторией клонирования вирусных геномов

105064, Москва, Малый Казенный пер., д 5А

Россия

В. В. Доценко

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-5866-944X
105064, Москва Россия

Л. Н. Нестеренко

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-3825-3906
105064, Москва Россия

Л. Н. Лухверчик

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-2997-8892
105064, Москва Россия

В. Ю. Кабаргина

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-8784-4497
105064, Москва Россия

И. И. Амиантова

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0003-3483-0128
105064, Москва Россия

М. В. Жукина

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-2329-5089
105064, Москва Россия

С. В. Жаворонок

Белорусский государственный медицинский университет

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0001-9727-1103
220116, Минск Белоруссия

З. Ш. Нурматов

НПО «Профилактическая медицина»

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0003-3481-227X
720005, Бишкек Киргизия

А. З. Нурматов

НПО «Профилактическая медицина»

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-0717-4172
720005, Бишкек Киргизия

В. В. Зверев

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-0017-1892
105064, Москва Россия

Список литературы

  1. Favorov M.O., Fields H.A., Purdy M.A., Yashina T.L., Aleksandrov A.G., Alter M.J., et al. Serologic identification of hepatitis E virus infections in epidemic and endemic settings. J. Med. Virol. 1992; 36(4): 246-50. DOI: http://doi.org/10.1002/jmv.1890360403
  2. Khudyakov Y.E., Kamili S. Serological diagnostics of hepatitis E virus infection. Virus Res. 2011; 161(1): 84-92. DOI: http://doi.org/10.1016/j.virusres.2011.06.006
  3. EASL Clinical Practice Guidelines on hepatitis E virus infection. J. Hepathol. 2018; 68(6): 1256-71. DOI: http://doi.org/10.1016/j.jhep.2018.03.005
  4. Kodani M., Kamili N.A., Tejada-Strop A., Poe A., Denniston M.M., Drobeniuc J., et al. Variability in the performance characteristics of IgG anti-HEV assays and its impact on reliability of seroprevalence rates of hepatitis E. J. Med. Virol. 2017; 89(6): 1055-61. DOI: http://doi.org/10.1002/jmv.24741
  5. Hartl J., Otto B., Madden R.G., Webb G., Woolson K.L., Kriston L., et al. Hepatitis E seroprevalence in Europe: a meta-analysis. Viruses. 2016; 8(8): 211. DOI: http://doi.org/10.3390/v8080211
  6. Mikrogen. recomLine HEV IgG/IgM. Available at: https://mikrogen.de/english/deutschland/products/product-overview/testsystem/hev-iggigm.html
  7. Ma H., Song X., Li Z., Harrison T.J., Zhang H., Huang W., et al. Varying abilities of recombinant polypeptides from different regions of hepatitis E virus ORF2 and ORF3 to detect anti-HEV immunoglobulin M. J. Med. Virol. 2009; 81(6): 1052-61. DOI: http://doi.org/10.1002/jmv.21484
  8. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н., Амиантова И.И., Доценко В.В. и др. Рекомбинантный белок, содержащий антигенно-значимые фрагменты белков вируса гепатита Е, используемый в тест-системах для серодиагностики гепатита Е (варианты). Патент РФ № 2711907C2; 2020.
  9. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н., Доценко В.В., Амиантова И.И. и др. Получение рекомбинантного белка ORF3 вируса гепатита Е 1-го генотипа с применением метода оптимизации кодонов. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2017; 94(6): 63-72. DOI: http://doi.org/10.36233/0372-9311-2017-6-63-72
  10. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н., Доценко В.В., Амиантова И.И. и др. Получение рекомбинантного аналога капсидного белка вируса гепатита Е первого генотипа: клонирование, экспрессия, очистка, оценка антигенных свойств. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2017; 94(6): 72-80. DOI: http://doi.org/10.36233/0372-9311-2017-6-72-80
  11. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н., Милованова А.В., Аммур Ю.И. и др. Получение рекомбинантного белка ORF3 вируса гепатита Е 3 генотипа и оценка его антигенных свойств. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2018; 95(5): 46-53. DOI: http://doi.org/10.36233/0372-9311-2018-5-46-53
  12. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н., Доценко В.В., Амиантова И.И. и др. Разработка рекомбинантного белка капсида вируса гепатита е третьего генотипа: клонирование, экспрессия, очистка, оценка антигенных свойств. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2019; 96(1): 10-7. DOI: http://doi.org/10.36233/0372-9311-2019-1-10-17
  13. Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Штамм бактерий Escherichia coli, используемый для получения рекомбинантных белков. Патент РФ № 2043409; 1992.
  14. Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Вектор pEL5a, предназначенный для экспрессии чужеродной ДНК. Патент РФ № 2071501; 1992.
  15. Ulanova T.I., Obriadina A.P., Talekar G., Burkov A.N., Fields H.A., Khudyakov Y.E. A new artificial antigen of the hepatitis E virus. J. Immunoassay Immunochem. 2009; 30(1): 18-39. DOI: http://doi.org/10.1080/15321810802570269
  16. Avellon A., Morago L., Garcia-Galera del Carmen M., Munoz M., Echevarría J.M. Comparative sensitivity of commercial tests for hepatitis E genotype 3 virus antibody detection. J. Med. Virol. 2015; 87(11): 1934-9. DOI: http://doi.org/10.1002/jmv.24251
  17. Al-Sadeq Duaa W., Majdalawieh A.F., Mesleh A.G., Abdalla O.M., Nasrallah G.K. Laboratory challenges in the diagnosis of hepatitis E virus. J. Med. Microbiol. 2018; 67(4): 466-80. DOI: http://doi.org/10.1099/jmm.0.000706

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Алаторцева Г.И., Доценко В.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н., Кабаргина В.Ю., Амиантова И.И., Жукина М.В., Жаворонок С.В., Нурматов З.Ш., Нурматов А.З., Зверев В.В., 2020

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».